[发明专利]具有免疫增强活性的包含寡核苷酸的复合体及其用途

说明书

本发明提供包含人源化K型CpG寡脱氧核苷酸和多脱氧腺苷酸的寡脱氧核苷酸，其中多脱氧腺苷酸位于人源化的K型CpG寡脱氧核苷酸的3'侧。本发明还提供了包含该寡脱氧核苷酸和β‑1,3‑葡聚糖的复合体。

本申请是申请日为2014年9月19日，申请号为201480051586.2，发明名称为“具有免疫增强活性的包含寡核苷酸的复合体及其用途”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及具有免疫刺激活性的包含寡核苷酸的复合体及其用途。更具体而言，本发明涉及包含具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸（ODN）和β-葡聚糖的复合体及其药物用途。

背景技术

CpG寡脱氧核苷酸（CpG ODN）是包含免疫刺激CpG基序的短的（约20个碱基对）、单链的合成DNA片段，是Toll样受体9（TLR9）的有效激动剂，活化树突细胞（DC）和B细胞以产生I型干扰素（IFN）和炎性细胞因子（非专利文件1、2），并且作为对于Th1型体液和细胞免疫应答（包括细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答）的佐剂（非专利文件3、4）。因此，CpG ODN已假定为针对传染病、癌症、哮喘和花粉症的可能的免疫治疗剂（非专利文件2、5）。

存在至少四种类型的CpG ODN，其每一种具有不同的骨架、序列和免疫刺激特性（非专利文件6）。D（也称为A）型CpG ODN通常包含具有磷酸二酯（PO）骨架和硫代磷酸酯（PS）多G尾的一个回文CpG基序，其活化类浆细胞DC（pDC）以产生大量的IFN-α，但无法诱导pDC成熟和B细胞活化（非专利文件7、8）。其他三类ODN由PS骨架组成。K（也称为B）型CpG ODN含有非回文的多CpG基序，并且强烈活化B细胞以产生IL-6和pDC以成熟，但几乎不产生IFN-α（非专利文件8、9）。近期，C和P型CpG ODN已被开发；这些分别含有一个和两个回文CpG序列，其两个均可以如K型活化B细胞和如D型活化pDC，尽管相比于P型CpG ODN，C型CpG ODN诱导较弱的IFN-α产生（非专利文件10-12）。许多优秀的K型CpG ODN描述于专利文件1中。

D和P型CpG ODN已显示形成高级结构Hoogsteen碱基配对以分别形成称为G四联体(tetrad)的平行四倍结构和顺式和反式回文部分之间的沃森克里克碱基配对，其对于通过pDC的活跃的IFN-α产生是必需的（非专利文件12-14）。尽管此类更高级结构似乎对于定位至早期内体和经TLR9的信号传导是必需的，但它们受制于产物多态性、聚集和沉淀，因而阻碍了其临床应用（非专利文件15）。因此，仅K和C型CpG ODN通常可用作免疫治疗剂和疫苗佐剂用于人使用（非专利文件16和17）。虽然K型CpG ODN在人临床试验中增强靶向传染病和癌症的疫苗的免疫原性（非专利文件6、16），但抗原和K型CpG ODN之间的化学和物理结合对于最优佐剂效应是必需的。这些结果表明这四种（K、D、P和C）类型的CpG ODN具有优点和缺点，然而开发活化B细胞和pDC两者而无聚集的“一体化（all-in-one）”CpG ODN尚未完成。

裂褶菌多糖（SPG），一种来源于裂褶菌(Schizophyllum commune)的可溶性β-1,3-葡聚糖，是在日本被批准作为宫颈癌患者的放疗增强剂的药物，持续最近三十年（非专利文件18）。类似地，香菇多糖（LNT），一种来源于香菇的可溶性β-1,3-葡聚糖，是于1985年批准的药物，且与氟嘧啶药物组合使用，用于无法实施手术的和复发性胃癌患者（非专利文件19、20）。β-1,3-葡聚糖已显示与多脱氧腺苷酸（dA）形成作为三链螺旋结构的复合体（非专利文件21）。

专利文件2-4公开了包括裂褶菌多糖和核酸（基因）作为基因载体的β-1,3-葡聚糖的复合体的用途。这些文件描述了形成复合体增强了基因的反义作用及其针对核酸酶的抗性作用。

专利文件5公开了具有β-1,3-键的多糖作为载体（转染剂）增强具有CpG序列的免疫刺激寡核苷酸的用途，其中磷酸二酯键被硫代磷酸酯键或二硫代磷酸酯键所取代。