[发明专利]一种生物样品中小儿消积止咳口服液代表成分及其代谢产物的测定方法

说明书

本发明涉及一种生物样品中小儿消积止咳口服液代表成分及其代谢产物的测定方法，属于医药技术领域。该方法是采用超高效液相色谱法‑电喷雾离子化串联质谱法来检测生物样品中小儿消积止咳口服液代表成分及其代谢产物的，液相条件中流动相由0.1％甲酸‑5mM乙酸铵水和乙腈组成，梯度洗脱。本发明所建立的测定生物样品中小儿消积止咳口服液代表成分的UPLC‑MS/MS测定法在准确度、精密度、专属性、稳定性、提取回收率及基质效应等方面均达到了中国药典2015年版以及SFDA2014年颁布的《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》对生物样品的分析要求。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种生物样品中小儿消积止咳口服液代表成分及其代谢产物的测定方法。

背景技术

小儿消积止咳口服液由鲁南厚普制药有限公司独家生产，清热肃肺，消积止咳。用于小儿饮食积滞、痰热壅肺所致的咳嗽、夜间加重、喉间痰鸣、腹胀、口臭。成份包括：炒山楂、槟榔、枳实、蜜枇杷叶、瓜蒌、炒莱菔子、炒葶苈子、桔梗、连翘、蝉蜕。方中山楂、槟榔，消食导滞，食积得消，则郁热痰浊无依、生热生痰无源。以枇杷叶、瓜蒌、桔梗、连翘清肺化痰，宣散肺气，痰热消，肺热清，肺气降，则咳嗽自止。葶苈子泻肺平喘，莱菔子消食化积兼降气化痰，蝉蜕清肺热、宣肺热，枳实行气消痰。桔梗除宣散肺气、祛痰止咳外，还能引导诸药直达病所。诸药合用，达到消积化痰，宣肺止咳的功效。

小儿消积止咳口服液的质量控制成分为枳实的主成分辛弗林，目前对于口服小儿消积止咳口服液后，辛弗林的体内代谢情况研究较少，特别在幼龄动物体内，面临采样困难，样品量少的问题。所以急需开发一种具有足够灵敏度、准确度的生物样品测定方法，探讨小儿消积止咳口服液口服后的体内动态过程。

2020年11月26日，IARC在《柳叶刀-肿瘤学》发表了对槟榔主要活性成分—槟榔碱(arecoline)致癌性的主要评估结论，槟榔碱被定为2B类致癌物。鉴于小儿消积止咳口服液中含有槟榔这味药材，对其主要活性成分槟榔碱的吸收入血情况进行考察颇有必要。因此，急待开发出一种稳定、准确、检测限低的液质分析方法，既能考察有效成分辛弗林的吸收入血情况，又能监测毒性成分槟榔碱的含量，这对确定小儿消积止咳口服液的有效性和安全性、指导新药开发以及指导临床合理用药有着十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测生物样品中小儿消积止咳口服液代表成分及其代谢产物的方法，具体的为采用超高效液相色谱法-电喷雾离子化串联质谱法即UPLC-MS/MS法检测生物样品中小儿消积止咳口服液代表成分辛弗林、槟榔碱以及辛弗林的Ⅱ相代谢产物(葡萄糖醛酸结合型辛弗林)和槟榔碱的Ⅰ相代谢产物(槟榔次碱)；其中辛弗林的Ⅱ相代谢产物(即葡萄糖醛酸结合型辛弗林)通过将生物样品酶解后测定总的辛弗林来实现，其他成分通过直接测定生物样品中的游离药物浓度来实现。

即采用UPLC-MS/MS法检测生物样品中游离辛弗林、总辛弗林、游离槟榔碱、游离槟榔次碱浓度。

以上本发明所述的生物样品包括但不限于血液、尿液、胆汁、脏器、粪便等。

本方法中生物样品采集后用0.1％甲酸生理盐水作为稳定剂，游离药物浓度测定采用有机溶剂直接沉淀法处理；总的药物浓度采用先酶解再沉淀的方法，两种均用乙腈作为沉淀溶剂；以氘代同位素作为生物样品测定的内标，即以[13C,2H3]辛弗林、D5-氢溴酸槟榔碱为内标物。

本发明上述所述的测定方法中液相系统的洗脱条件为：

流动相为A相(0.1％甲酸-5mM乙酸铵水)-B相(乙腈)；

梯度洗脱程序为：

色谱柱为HILIC柱(50mm×2.1mm，1.9μm)；

流速：0.2mL/min；

柱温：30～40℃；