[发明专利]一种腺病毒载体重组新冠病毒B.1.1.529变异株疫苗及其应用

说明书

本发明提供了一种以人5型复制缺陷型腺病毒为载体的新型冠状病毒B.1.1.529变异株疫苗。在表达蛋白主体依然为新型冠状病毒B.1.1.529变异株刺突蛋白的前提下，以经验优化后核酸序列制备的重组病毒载体疫苗，免疫后可有效刺激机体产生针对B.1.1.529变异株病毒的结合抗体、中和抗体以及细胞免疫反应，具有良好的免疫原性。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体而言，涉及一种重组新型冠状病毒B.1.1.529变异株疫苗。

背景技术

新冠病毒为RNA病毒，在持续传播过程中极易产生突变，并自然筛选出传播能力增强的优势变异株。2021年11月首次发现奥密克戎（Omicron, B.1.1.529）变异株，11月26日，世界卫生组织将其定义为第五种“关切变异株”。2021年12月以后，该变异株开始在世界范围内广泛流行，至2022年2月底，B.1.1. 529变异株覆盖率接近100%。

与新型冠状病毒原型株相比，B.1.1.529变异株刺突蛋白（Spike, S）中含有超过37个突变位点，其中约有15个突变位点位于受体结合区。刺突蛋白中累积的大量突变使得该该流行株一定程度上能够逃逸新冠原型株疫苗激发的抗体，进而引起新冠原型株疫苗失效或保护力降低，为新冠疫情防控工作带来巨大压力。

本申请人前期参与研发的非复制型5 型腺病毒载体重组新型冠状病毒疫苗（CN111218459A及WO2021184560）的I、II 期临床试验显示，该疫苗在受试者中有良好的安全性，99.5%的受试者产生了特异抗体，90%的受试者产生了特异性细胞免疫反应。同时，III期临床结果显示，单剂接种14 天后预防所有症状新冠肺炎的保护效力为68.8%，预防重症新冠肺炎的保护效力为95.5%，显示了优异的保护效果。然而，该疫苗同样为新冠病毒原型株刺突蛋白为主要保护性抗原构建而成。考虑到B.1.1.529变异株在全球范围内广泛流行，本发明的目的就是提供一种针对新冠病毒B.1.1.529变异株的疫苗，以应对持续蔓延的变异株新冠疫情。

发明内容

基于上述发明目的，本发明首先提供了一种表达新型冠状病毒变异株刺突蛋白的多核苷酸，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1所示。

第二，本发明提供了一种含有上述多核苷酸的重组人5型腺病毒。

在一个优选的实施方案中，所述重组人5型腺病毒为重组人5型复制缺陷型腺病毒。

在一个更为优选的实施方案中，所述重组人5型腺病毒为重组E1、E3联合缺失的人5型复制缺陷型腺病毒。所述多核苷酸以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺病毒E1基因的HEK293细胞为包装细胞系，经包装获得重组腺病毒载体新型冠状病毒疫苗。

第四，本发明提供了上述核苷酸及重组腺病毒在制备预防新型冠状病毒肺炎疫苗中的应用。

在一个优选的实施方案中，所述重组腺病毒被制备为注射剂、滴鼻剂、喷雾剂或吸入剂。

最后，本发明提供了一种表达上述新型冠状病毒变异株抗原蛋白的重组人5型腺病毒的制备方法，所述方法包含以下步骤：

（1）构建包含上述的多核苷酸序列的穿梭质粒载体；

（2）将步骤（1）所述穿梭载体与骨架质粒共转宿主细胞，包装重组复制缺陷型腺病毒；

（3）对步骤（2）所述重组腺病毒进行扩大培养，验证重组病毒保护性抗原表达水平。

在一个优选的实施方案中，步骤（2）所述宿主细胞为HEK293细胞。