[发明专利]一种EB病毒感染棉耳绒猴模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种EB病毒感染棉耳绒猴模型的构建方法，包括对棉耳绒猴进行EB病毒感染；所述EB病毒感染剂量为1～2×10¹⁰copies/kg。本发明首次构建了EB病毒感染棉耳绒猴模型，通过对病毒滴度、剂量、麻醉方式等条件的优化，可以使棉耳绒猴长期携带EB病毒，第18周淋巴结中仍然检测到了EB病毒存在；为EB病毒的预防性疫苗及感染EB病毒后清除及控制提供了灵长类动物模型；可用于EB病毒疫苗保护效果尤其是长期保护效果的评价；而且建立了系统的分子，影像及病理检测体系，能够全方位，动态的检测并提供不同滴度EB病毒感染棉耳绒猴的全方面资料。

技术领域

本发明属于动物模型构建领域，具体涉及一种EB病毒感染棉耳绒猴模型的构建方法。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus)属γ-孢疹病毒，是一种普遍存在的人类病毒，可感染全球90％以上的人口。它具有潜在感染正常上皮细胞、B淋巴细胞和NK/T细胞的特性，当人体免疫系统失调时可发展成多种疾病甚至恶性肿瘤，如传染性单核细胞增多症(IM)，免疫缺陷个体B细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤(BL)，霍奇金病(HG)，NK/T细胞淋巴瘤，胃癌和鼻咽癌等。

因为其具有潜在致癌性，所以研发预防性疫苗来阻断其感染显得尤为重要。EB病毒具有寄主嗜好性，在自然界的正常寄主为人。虽然人们已建立了EB病毒感染人源化小鼠的动物模型，但是人源化小鼠不能产生体液免疫。体液免疫尤其中和抗体的产生对EB病毒的预防至关重要，因此构建一种EB病毒能够感染且免疫系统正常的动物模型对其疫苗研发显得格外重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种EB病毒感染棉耳绒猴模型的构建方法。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一方面，提供一种EB病毒感染棉耳绒猴模型的构建方法，包括对棉耳绒猴进行EB病毒感染；所述EB病毒感染剂量为1-2×10¹⁰copies/kg。

在本发明的一些实施方式中，所述EB病毒感染剂量为500～800GRU/kg；其中关于GRU与病毒拷贝数的转换方式是：把相应GRU量的EB病毒提取DNA，用定量PCR计算出这些GRU里面EB病毒DNA的拷贝数。

在本发明的一些实施方式中，所述EB病毒感染的方式为接触传播、口服、静脉注射、皮下注射、腹腔注射或粘膜给药。

在本发明的一些实施方式中，所述EB病毒感染的方式为静脉注射和/或腹腔注射；所述静脉注射进一步为大腿静脉注射。

在本发明的一些实施方式中，还包括感染前进行麻醉，麻醉时使用的麻醉剂为舒泰、氯胺酮、戊巴比妥中的至少一种。优选为舒泰，因为舒泰能获得最好的麻醉效果，即5分钟内即入睡且麻醉时间长达1小时。其中本发明对舒泰的具体规格不做限定，常用的有舒泰20、舒泰50、舒泰100等规格均可。

在本发明的一些优选实施方式中，所述麻醉剂的使用剂量为12～16mg/kg，例如12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg或16mg/kg。

在本发明的一些优选实施方式中，所述麻醉剂的使用剂量为14mg/kg。

在本发明的一些实施方式中，所述舒泰的主要成分为替来他明和唑拉西半；其中替来他明6-8mg/kg，唑拉西半6-8mg/kg。

在本发明的一些实施方式中，所述麻醉剂的注射方式为肌肉注射、皮下注射或静脉注射；优选为肌肉注射。

在本发明的一些实施方式中，所述方法还包括对模型进行评估；所述评估内容包括：体重，体温，身体状况、EB病毒抗体滴度、EB病毒拷贝数、棉耳绒猴淋巴结状况或EBER鉴定。

在本发明的一些实施方式中，所述棉耳绒猴淋巴结状况为棉耳绒猴腋窝淋巴结状况、腹股沟淋巴结状况。