[发明专利]Au@Pd核壳八面体纳米酶双信号放大SPR检测探针制备方法

说明书

本发明公开了一种Au@Pd核壳八面体纳米酶双信号放大SPR检测探针制备方法，先合成Au@Pd核壳八面体纳米酶，利用Pd与氨基的牢固结合的特点直接将二级抗体固定于其表面得到双信号放大探针，通过在表面等离子体共振分析仪的芯片表面修饰金黄色葡萄糖球菌蛋白以固定一级抗体，用牛血清蛋白封闭再结合抗原，进一步结合探针，SPR信号放大，再通入苯胺和H₂O₂的混合溶液，利用纳米酶在SPR芯片表面催化苯胺的聚合反应达到二次信号放大目的。当SPR检测探针捕获待检测抗原分子后，具有过氧化物酶模拟酶性质的Au@Pd核壳八面体纳米酶，可在SPR芯片表面催化苯胺聚合生成聚苯胺，从而形成二次SPR信号放大，可用于高灵敏的SPR免疫传感器检测疾病标志物等生物分子。

技术领域

本发明属于免疫学领域和电化学分析技术领域，更具体地说，本发明涉及一种Au@Pd核壳八面体纳米酶双信号放大表面等离子共振(SPR)检测探针的制备方法。

背景技术

表面等离子体共振传感是基于表面等离子体共振这一光学现象发展的。Liedberg等人于1983年发现金属表面附近的质量累积会影响金属与电介质交界面的折射率，而SPR信号对折射率变化很敏感，首次开发了表面等离子体共振传感器研究结合反应。SPR传感器为研究分子结合提供了一种快速、实时、高选择性和高灵敏性的测定方法。SPR可在分子水平上分析生物及药物分子之间的相互作用，如：蛋白质、DNA、脂质到小分子、噬菌体及病毒等，SPR传感器都可以研究其相互作用而应用于临床医学、药物筛选、食品安全及环境检测领域。SPR传感器电化学分析技术和免疫检测技术相结合，因制作简单、损耗小及高选择性和实时性等优点而备受关注。

夹心免疫分析是利用抗体与待测抗原发生特异性结合时，根据待测物浓度对SPR信号变化的影响关系实现免疫检测。相对于传统的修饰基底以增大SPR信号的方法，本发明的方法可进行二次信号放大近而提高检测灵敏度。

用于增大SPR信号的材料有聚合物和纳米材料。目前，应用于SPR传感器的纳米材料包括磁性纳米材料、碳纳米材料和贵金属纳米材料。其中，贵金属纳米材料中金、钯纳米粒子具有优异的光学及电学性质，通过与SPR金膜之间的电磁耦合的综合作用导致较大的SPR信号变化。由于核壳纳米材料的特殊结构，具有现出优异的高比表面积、良好的生物相容性、稳定的光学性质。纳米模拟酶融合了化学催化剂与生物催化剂的独特优势。与天然酶相比，纳米酶具有低成本，高稳定性，高耐受性，可长期储存，易于大规模生产及活性可调控等优势。相比单金属，具有核壳结构的双金属具有更优良的模拟酶催化性能，而被用于生物传感，疾病诊断治疗方面。本发明将Ag和Pd复合后得到Au@Pd核壳八面体纳米酶，基于该复合纳米材料的优良性能，可以很好的应用在生物传感器领域，尚未有Au@Pd核壳八面体纳米酶用于表面等离子免疫传感领域的报道。苯胺在催化过氧化氢的作用下可以生成聚苯胺，可以二次信号放大以提高灵敏度。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供一种Au@Pd核壳八面体纳米酶双信号放大表面等离子体共振(SPR)检测探针的制备，其基本思路为：先合成Au@Pd核壳八面体纳米酶，利用Pd与氨基的牢固结合的特点直接将二级抗体(Ab₂)固定于其表面得到双信号放大探针(Au@Pd-Ab₂)，通过在表面等离子体共振分析仪的芯片表面修饰金黄色葡萄糖球菌蛋白以固定一级抗体(Ab₁)，用牛血清蛋白封闭再结合抗原，进一步结合探针，SPR信号放大，再通入苯胺和H₂O₂的混合溶液，利用纳米酶在SPR芯片表面催化苯胺的聚合反应达到二次信号放大目的。利用SPR信号变化与抗原浓度之间的线性关系，可用于高灵敏的SPR免疫传感器检测蛋白质分子。

合成Au@Pd核壳八面体纳米酶：