[发明专利]一种苜蓿的遗传转化方法

说明书

本发明涉及苜蓿遗传转化技术领域，特别是涉及一种苜蓿的遗传转化方法。本发明提供的遗传转化方法包括以下步骤：将含有目的基因的侵染液和待转化的外植体混合，在真空度为0.085Mpa～0.09Mpa下处理10min，得到第一混合液；将所述第一混合液超声处理4～5min，得到第二混合液；将所述第二混合液在真空度为0.085Mpa～0.09Mpa下处理10min，得到侵染后的外植体；将侵染后的外植体进行筛选，得到转化后的植株。本发明通过适宜的真空加超声处理，显著提高了苜蓿的遗传转化率，遗传转化率为7.1％～14.3％；且遗传转化率稳定，具有高效性和可重复的优势。

技术领域

本发明涉及苜蓿遗传转化技术领域，特别是涉及一种苜蓿的遗传转化方法。

背景技术

紫花苜蓿(Medicago sativa L.)是我国重要的种植牧草之一，种植面积一直位列各类牧草之首，其蛋白质含量丰富，营养价值高，素有“牧草之王”之美誉。然而，由于低温、干旱、盐碱等逆境胁迫严重影响着苜蓿的生长发育。近年来，抗逆品种的培育被认为是提高紫花苜蓿抵御逆境胁迫的有效途径。随着生物技术的发展，紫花苜蓿遗传转化的研究取得了显著成绩。但受再生频率低、农杆菌感染后外植体不易分化等因素的影响，紫花苜蓿遗传转化率一直较低，难以满足基因工程技术迅速发展的需要。

黄花苜蓿(Medicago falcata L.)是苜蓿属的一种重要牧草，是高寒区人工草地建植和天然草地改良的理想牧草，因其具有较强的抗旱、抗寒、耐盐碱、耐贫瘠等特点，被作为豆科牧草抗逆育种中重要的种质资源。虽然黄花苜蓿产量和再生性逊色于紫花苜蓿，但其抗逆性却优于紫花苜蓿。因此，黄花苜蓿在紫花苜蓿抗性育种中具有重要作用。

近年来，随着生物技术的快速发展，利用黄花苜蓿抗逆性基因改良紫花苜蓿性状已成为苜蓿遗传育种的重要途径。然而。由于黄花苜蓿遗传转化体系尚未建立，严重影响了紫花苜蓿遗传转化的步伐。因此，亟待建立一套稳定、高效、转化频率高、可重复的苜蓿遗传转化体系，这对于苜蓿分子遗传育种的发展具有重要的推动作用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种苜蓿的遗传转化方法。本发明提供的遗传转化方法具有稳定、高效、转化频率高和可重复的优势。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种苜蓿的遗传转化方法，包括以下步骤：

将含有目的基因的侵染液和待转化的外植体混合，在真空度为0.085Mpa～0.09Mpa下处理10min，得到第一混合液；

将所述第一混合液超声处理4～5min，得到第二混合液；

将所述第二混合液在真空度为0.085Mpa～0.09Mpa下处理10min，得到侵染后的外植体。

优选的，所述侵染液包括液体培养基和含有目的基因的受体菌；

所述液体培养基除基本培养基外，还包括：蔗糖30g/L、乙酰丁香酮100μmol/L、2,4-D4mg/L和6-BA0.5mg/L；