[发明专利]一种基于核磁共振磷谱的磷酸修饰酶活性的检测方法

权利要求书

1.一种基于核磁共振磷谱³¹PNMR的磷酸修饰酶活性的检测方法，其特征在于包括以下的步骤：

S1:配制已知不同浓度的底物或产物的标准溶液，分别进行核磁共振磷谱³¹PNMR测定，得到所述的不同浓度的底物或产物的标准溶液的峰面积百分比，并将浓度与峰面积百分比绘制标准曲线，得到浓度与峰面积百分比之间关系的线性方程式；

S2:通过核磁共振磷谱³¹PNMR测得待测液的峰面积百分比，代入步骤S1的线性方程式得到底物或产物的初始浓度，将所述的待测液、缓冲溶液和磷酸修饰酶进行混合孵育，孵育后得到反应液，所述的反应液通过核磁共振磷谱³¹PNMR检测，得到孵育后的所述的反应液的底物或产物的峰面积百分比；

S3:将步骤S2中所述的反应液的底物或产物的峰面积百分比代入步骤S1得到的线性方程式，得到所述的反应液的底物或产物的浓度；

S4:通过将步骤S3得到的所述的反应液的底物或产物的浓度与步骤S2的底物或产物的初始浓度对比得到浓度的变化量，利用单位时间内所述的浓度变化量计算得到磷酸修饰酶的酶活性。

2.根据权利要求1所述的一种基于核磁共振磷谱³¹PNMR的磷酸修饰酶活性的检测方法，其特征在于步骤S2中的所述的磷酸修饰酶能够催化所述的底物磷酸化修饰以生成所述的产物或催化所述的底物去磷酸化修饰以生成所述的产物。

3.根据权利要求1所述的一种基于核磁共振磷谱³¹PNMR的磷酸修饰酶活性的检测方法，其特征在于步骤S2中所述的磷酸修饰酶为磷酸酶、激酶、磷酸二酯酶或环化酶。

4.根据权利要求1所述的一种基于核磁共振磷谱³¹PNMR的磷酸修饰酶活性的检测方法，其特征在于步骤S2中所述的磷酸修饰酶的浓度为0.2～1mg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种基于核磁共振磷谱³¹PNMR的磷酸修饰酶活性的检测方法，其特征在于步骤S2中所述的缓冲溶液是pH为6.5～8.0的40～50mM Tris-HCl，并含有浓度为5～10mM的MgCl₂。

6.根据权利要求1所述的一种基于核磁共振磷谱³¹PNMR的磷酸修饰酶活性的检测方法，其特征在于步骤S2中所述的孵育时间为10min～3h。

7.根据权利要求1所述的一种基于核磁共振磷谱³¹PNMR的磷酸修饰酶活性的检测方法，其特征在于步骤S2中所述的孵育温度为37℃。