[发明专利]一种用于检测胶质纤维酸性蛋白的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测胶质纤维酸性蛋白的试剂盒，所述的试剂盒中包括两种抗胶质纤维酸性蛋白抗体、链霉亲和素、生物素、碱性磷酸酶。本发明提供的方法使待测物形成“碱性磷酸酶‑抗体1‑抗原‑抗体2‑生物素‑链霉亲和素‑磁微粒”的树状结构。这种结构在磁微粒数量不变的情况下可以使信号值放大4倍；在信号值相同的情况下可以使磁微粒和抗体2用量减小4倍，节省大量生产成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的试剂盒。

背景技术

创伤性脑损伤(TBI)是由外力引起的大脑损伤，会破坏大脑正常功能，导致人的认知能力或身体机能受损。在所有类型TBI中，最常见的后遗症为头痛(47.9％)和记忆异常(42％)，约三成患者需要心理辅导或神经病学治疗。TBI是神经外科中最常见疾病，也是世界范围内主要的死亡原因及致残因素之一，其后遗症对患者健康有永久性影响。

疑似TBI的医疗护理流程分为三步。首先是使用15分格拉斯哥昏迷量表(GCS)(美国外科医师学会创伤委员会，1997)对神经进行评估，以评定脑损伤严重度，然后进行结构性神经影像学检查，最常见的是通过头部CT扫描来可视化骨折和颅内病变。最后根据CT结果制定治疗方案、留院观察或出院。

目前，CT扫描是广泛用于帮助临床医师评估TBI的唯一客观、简单且可靠的选择。然而，CT结果的正确性与CT设备的准确性及医师的阅片水平直接相关，和其他检测方法相比，是一种相对主观的判断方法。约90％轻度TBI(有时被称为“脑震荡”)的CT扫描结果呈阴性。这些患者中只有不到1％的人需进行神经外科干预。鉴于这些患者的CT扫描阳性百分比非常低且不必要影像学检测可能会增加辐射诱发癌变的风险，寻找开发其他的脑损伤诊断方法来准确判断颅脑损伤程度和评估预后，具有巨大的临床意义和战略意义。

胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是一种Ⅲ型中间纤丝蛋白。人的GFAP由432个氨基酸组成，主要分布于中枢神经系统的星形胶质细胞，参与细胞骨架的构成并维持其张力强度。GFAP是一种神经系统特异性蛋白。其在脑损伤中对神经系统功能的恢复有重要影响。

在TBI中，GFAP在1小时内会通过血脑屏障进入血液，导致血清GFAP显著升高。对TBI的早期诊断，鉴别诊断和判断预后有重要的意义，临床上主要用于脑外伤的辅助诊断。

现有技术已公开利用生物素-亲和素放大系统,将一组抗抗苗勒氏管激素(AMH)的第一抗体包被微孔板,同时用生物素标记第二抗体,与第一抗体-抗原复合物结合之后,再与生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶结合物结合,加入发光底物,建立AMH酶促化学发光免疫分析方法,同时对这一体系的线性,灵敏度,特异度,稳定性,回收率等参数进行检测,并与常规ELISA法进行相比检测AMH浓度.结果显示该法线性检测范围为(0.42-50.00)U/mL,该体系稳定性好,灵敏度0.42U/mL,批内差异小于10.0％,批间差异小于10.0％,与常规ELISA对比差异有统计学意义。表明AMH的生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶酶促化学发光免疫分析易于操作,灵敏度高,价格低廉,适用于临床检测。^[1]