[发明专利]一种检测碱性磷酸酶的比色探针及检测方法

说明书

本发明涉及材料及分析检测领域，公开了一种检测碱性磷酸酶的比色探针及检测方法。比色探针为Pt/MIL‑88B‑NH₂有机金属框架与ATP的偶联物。利用Pt/MIL‑88B‑NH₂‑ATP作为信号标签构建比色探针，当碱性磷酸酶存在时，可以水解ATP产生ADP，由于ADP与Pt/MIL‑88B‑NH₂结合产生Pt/MIL‑88B‑NH₂‑ADP络合物，其类过氧化物酶活性显著降低，催化活性降低，从而能够定性或定量检测碱性磷酸酶，其浓度与水解前后的650nm处吸光度比值成比例，通过测定产物吸光值或通过观察颜色深浅，可以判定ALP的含量。

技术领域

本发明属于材料及分析检测领域，具体涉及一种检测碱性磷酸酶的比色探针及其检测方法。

背景技术

碱性磷酸酶(ALP)是人体必需的一种水解酶，可以在碱性条件下对包括核酸、蛋白质等在内的一系列底物分子进行去磷酸化作用。它广泛参与生物体的多种生命过程，包括代谢、信号传导、分子传输以及基因表达等方面。在临床诊断中，ALP是一种重要的生物标志物，研究表明血清中ALP浓度升高，通常与骨骼疾病、肝胆疾病等相关；而代谢性疾病或血液系统疾病则会降低ALP的浓度。更值得注意的是，与ALP含量密切相关的疾病种类仍在增加，所以建立有效的ALP检测方法对于疾病诊断及其相关机理研究具有非常重要的意义。

目前，已近开发了许多检测ALP的方法，常见的有电泳法、比色法、荧光法、电化学法和化学发光等检测方法。其中比色法由于其简单的构建方式以及可以快速反馈结果的优势得到了许多研究者的青睐。更重要的是该方法还具有结果肉眼可视性的优点，使得实验结果更简单、直观，有很好的普遍性，在现场快速检测方面具有很好的应用和发展前景。

发明内容

本发明旨在提供一种无酶快速检测碱性磷酸酶的比色探针。

本发明另一个目的在于利用上述比色检测探针快速检测碱性磷酸酶的方法。

本发明解的技术方案为：一种用于检测碱性磷酸酶的比色探针，是Pt/MIL-88B-NH₂有机金属框架与ATP的偶联物。

所述的Pt/MIL-88B-NH₂有机金属框架制备方法包括如下步骤：

(1)铁盐与2-氨基对苯二甲酸、表面活性剂溶解于有机溶剂中，加入冰醋酸，105-120℃水热反应8-16h，洗涤干燥得到MIL-88B-NH₂；

铁盐中的铁离子与2-氨基对苯二甲酸、表面活性剂的摩尔比为1：1.5-2.5：0.01-0.025，优选为1：1.8-2.2：0.015-0.02；所述的冰醋酸与有机溶剂的体积比为1：15-20；

优选的，所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，铁盐为三氯化铁或硫酸铁；

(2)MIL-88B-NH₂与Pt纳米粒子溶液混合搅拌，离心取固体洗涤干燥，得到Pt/MIL-88B-NH2；

MIL-88B-NH₂与Pt纳米粒子用量比为3000-5000g：1mol，优选为3500-4500g：1mol。

所述的Pt纳米粒子粒径为2-5nm，优选为2-4nm；在本发明的一个优选方式中，粒径为3nm。

所述的Pt纳米粒子制备方法为：硼氢化钠溶液滴加到PVP和氯铂酸的混合溶液中，并搅拌反应1-5h，优选的，反应时间为1.5-3h。

氯铂酸与PVP的用量比为1mol：300-600g，优选为1mol：500-550g。

所述比色探针的制备方法包括如下步骤：