[发明专利]一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法

说明书

本发明公开了一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法，包括以下：步骤a，制备提取物；步骤b，制备第一样液；步骤c，制备第二样液；步骤d，制备待测样液；步骤e，比浊法测定待测样液对腐霉菌的生长抑制作用；步骤f，生长率数值质检；步骤g，结果判定。本发明的方法通过化学反应将氯唑西林转化为对腐霉菌具有专属杀菌性能的产物，进而利用生物培养方法对产物进行检测，相比于色谱法，其分析手续简便，快速，专属性强，灵敏度高，检验结果正确率高，不需要大型的分析仪器，耗时相对较少，分析成本低，对实验环境要求低，对操作人员要求低，适用于对水产品中是否含有氯唑西林进行日常监督检验。

技术领域

本发明涉及水产品检测领域，特别是涉及一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法。

背景技术

氯唑西林为半合成的耐青霉素酶的青霉素类药物。其抗菌作用特点是：对青霉素酶高度稳定（其稳定性高于其他耐青霉素酶的青霉素类药），对产青霉素酶的葡萄球菌属（包括金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌）的抗菌活性较苯唑西林强，但对青霉素敏感葡萄球菌和各种链球菌的抗菌作用较青霉素弱5~10倍。氯唑西林与青霉素相似，其通过与细菌细胞壁上主要青霉素结合蛋白(PBPs)结合，影响细菌细胞壁的合成，导致菌体肿胀破裂死亡，从而起抗菌作用。

其中水产品中限用药物包括：氯唑西林、氨苄西林、苄星青霉素、达氟沙星、溴氰菊酯、恩诺沙星、红霉素、氟甲喹、苯唑西林、恶喹酸、土霉素、四环素、磺胺类、甲砜霉素、甲氧苄啶等40余种。

目前商业化检测氯唑西林的方法主要有以下几种：

第一种方法是建立了动物源性食品中青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧苄西林、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、头孢喹肟、头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑啉和头孢哌酮13种B-内酰胺类药物残留检测的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC- M S /MS）分析方法，（孙雷，张骊，汪霞，王树槐，毕言锋，徐倩.超高效液相色谱-串联质谱法对动物源性食品中13种β-内酰胺类药物残留的检测[J].分析测试学报，2009，28(05)：576-580.）；

第二种方法是建立高效液相色谱法测定牛奶中氯唑西林残留的方法，其中牛奶样品用乙腈沉淀蛋白，三氯甲烷反萃取，有机相旋干用流动相溶解，正己烷除脂。0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH5.0）－乙腈（68:32）比例为流动相，C18反相色谱柱分离，紫外检测。（章敏，黄显会，杨刚，方秋华.牛奶中氯唑西林残留量的高效液相色谱法测定[J].动物医学进展,2012,33(06):56-60.DOI:10.16437/j.cnki.1007-5038.2012.06.023.）

第一种方法用到了超高效液相色谱-串联质谱法，该方法操作难度较大，处理步骤繁琐，耗时较长，仪器成本极高，一般单位或企业难以承担，且对于操作人员素质要求较高，整体检测成本过高。第二种方法使用的为普通液相色谱，操作虽较一法简单，但使用三氯甲烷作为反萃取试剂毒害较大，且过程中的沉淀、除脂操作可能误差较大，造成回收率偏低，实际操作过程中往往会造成较多的假阳性，而且方法主要针对于牛奶基质，对肉类等复杂基质是否同样适用也有待商榷。以上方法仪器、试剂、人工等成本均较高，不适合在较大范围开展，不适合日益增多的检测需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法。

根据本发明的一个方面，提供了一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法，包括以下：

步骤a，称取3g±0.1g待测均质样品于离心管中，加入乙腈、去离子水，涡旋提取，加入吸附剂后，混合，进行第一次离心，吸取上层清液分别加入两个离心管中，吹干，得到两份提取物；去离子水对待测均质样品进行稀释、分散，便于提取；吸附剂用于吸附样品中的油脂和蛋白，减少油脂和蛋白对乙腈、去离子水提取氯唑西林的影响；上层清液为乙腈与去离子水的混合物，乙腈与水互溶，乙腈与去离子水一起对待测均质样品进行初步提取，将待测均质样品中含有的氯唑西林提取到上层清液中；