[发明专利]一种抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一种抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体，其特征在于，所述全人双特异性抗体由抗人FRα抗体和抗人VEGF抗体联合构建而成。

2.根据权利要求1所述的全人双特异性抗体，其特征在于，所述抗人FRα抗体含有SEQID No.1所示的重链可变区序列和SEQ ID No.2所示的轻链可变区序列。

3.根据权利要求1所述的全人双特异性抗体，其特征在于，所述抗人VEGF抗体含有SEQID No.6所示的重链可变区序列和SEQ ID No.5所示的轻链可变区序列。

4.根据权利要求1所述的全人双特异性抗体，其特征在于，所述抗人FRα抗体和所述抗人VEGF抗体均以scFv形式表达。

5.根据权利要求2所述的全人双特异性抗体，其特征在于，所述抗人FRα的抗体重链可变区由SEQ ID No.3所示的核苷酸序列编码；所述抗人FRα的抗体轻链可变区由SEQ IDNo.4所示的核苷酸序列编码。

6.根据权利要求3所述的全人双特异性抗体，其特征在于，所述抗人VEGF的抗体重链可变区由SEQ ID No.8所示的核苷酸序列编码；所述抗人VEGF的抗体轻链可变区由SEQ IDNo.7所示的核苷酸序列编码。

7.根据权利要求1所述的全人双特异性抗体，其特征在于，所述全人双特异性抗体中还含有序列如SEQ ID No.12所示的Fc突变体片段。

8.根据权利要求7所述的全人双特异性抗体，其特征在于，所述Fc突变体片段由SEQ IDNo.17所示的核苷酸序列编码。

9.权利要求1-8任一项所述的全人双特异性抗体的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：

(1)利用卵巢癌腹水筛选、富集抗原特异性B细胞；

(2)从抗原特异性B细胞中，获取FRα抗体和VEGF抗体；

(3)利用FRα抗体和VEGF抗体建立双特异性抗体平台，得到scFv形式的FRα抗体和VEGF抗体；

(4)拼接scFv形式的FRα抗体和VEGF抗体，将Fc突变体片段Fcmu作为连接子，构建入载体，获取同时含有FRα(scFv)、Fcmu和VEGF(scFv)的质粒；

(5)将质粒转入宿主细胞，筛选得到高表达的细胞株；

(6)对高表达的细胞株培养纯化，得到同时含有FRα抗体、VEGF抗体和Fc突变体的蛋白，即为全人双特异性抗体。

10.根据权利要求9所述的全人双特异性抗体的筛选方法，其特征在于，所述Fc突变体片段的突变位点包括S298A、T307A、E333A、K334A、E380A、N430A。

11.权利要求1-8任一项所述的全人双特异性抗体在制备用于抑制血管生成的药物中应用。

12.权利要求1-8任一项所述的全人双特异性抗体在制备用于抗肿瘤药物中的应用。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肠癌、淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌、肝癌、肾癌、子宫颈癌和子宫内膜癌、骨肉瘤。

14.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体。