[发明专利]一种毛囊干细胞外泌体的分离方法及应用

权利要求书

1.一种毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

收集P5-P6毛囊干细胞的培养液，制得待分离品；再将所述待分离品与流动相混合，经过尺寸排阻柱进行分离，制得所述外泌体；所述尺寸排阻柱中填充有多孔微球，且所述多孔微球的制备方法如下：

将溶解后的聚乳酸与1w/v％-3w/v％的聚乙烯醇混合，经24h-36h的搅拌后，制得混合液一；再将所述混合液一与海藻酸钠混合，5h-7h后，制得混合液二；将所述混合液二滴入氯化钙溶液中，制得微球；将所述微球在碱液中浸泡20min-30min，制得多孔微球。

2.根据权利要求1所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，在所述尺寸排阻柱的两侧分别设置正电极和负电极，用于提供电压。

3.根据权利要求2所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，所述正电极和负电极提供的电压值为4V-6.5V。

4.根据权利要求1-3任一项所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，所述流动相为PBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，所述待分离品与所述流动相混合前，在800rpm-1000rpm的条件下进行离心。

6.根据权利要求1所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，在碱液中浸泡前，将所述微球与聚丙烯酰胺混合，并搅拌10h-14h。

7.根据权利要求6所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，搅拌后，将所述微球浸泡在戊二醛溶液中，并在50℃-55℃的水浴条件下搅拌40min-60min，再将所述微球在碱液中浸泡。

8.根据权利要求6或7所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，所述戊二醛的浓度为0.1w/v％-0.15w/v％。

9.根据权利要求1所述的毛囊干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，所述多孔微球的大小为5μm-15μm。

10.一种毛囊干细胞外泌体的应用，其特征在于，将权利要求1-9任一项分离获得的外泌体应用于防治脱发。