[发明专利]CasF2蛋白、CRISPR/Cas基因编辑系统及其在植物基因编辑中的应用在审
申请号: | 202210204370.1 | 申请日: | 2022-03-03 |
公开(公告)号: | CN114438056A | 公开(公告)日: | 2022-05-06 |
发明(设计)人: | 刘文平;蔡勤安;马瑞;郭东全;郭东梅;鲁昕;于志晶;李源;魏嘉 | 申请(专利权)人: | 吉林省农业科学院 |
主分类号: | C12N9/22 | 分类号: | C12N9/22;C12N15/113;C12N15/82;C12N15/84;C12N15/29;C12N15/53;A01H5/00;A01H6/20;A01H6/82 |
代理公司: | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人: | 宋南 |
地址: | 130033 吉林省长*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | casf2 蛋白 crispr cas 基因 编辑 系统 及其 植物 中的 应用 | ||
1.CasF2蛋白,其特征在于,所述CasF2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示;或与SEQID No.2所示的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加,且具有相同或相似生物学功能。
2.根据权利要求1所述的CasF2蛋白的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体包含权利要求2所述的核苷酸序列。
4.权利要求1所述CasF2蛋白、权利要求2所述的CasF2蛋白的编码基因或权利要求3所述的表达载体在基因编辑中的应用。
5.一种CRISPR/Cas基因编辑系统,其特征在于,所述基因编辑系统包含权利要求1所述的CasF2蛋白或表达所述CasF2蛋白的质粒。
6.根据权利要求5所述的CRISPR/Cas基因编辑系统,其特征在于,所述基因编辑系统还包含sgRNA或表达所述sgRNA的质粒。
7.根据权利要求5或权利要求6所述的CRISPR/Cas基因编辑系统在植物基因编辑中的应用;
优选地,所述植物为单子叶植物或双子叶植物;更优选地,所述植物选自拟南芥、烟草、大豆和玉米中的任一种。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述应用包括以下步骤:
(a)根据所述CasF2蛋白的PAM识别位点确定待编辑基因的sgRNA;
(b)将所述CasF2蛋白的基因序列和相应的sgRNA克隆到表达载体中;
(c)将所述表达载体转化到农杆菌中,通过农杆菌介导的遗传转化方法,将所述表达载体导入目标植物,获得定向基因编辑植株;
优选地,在所述遗传转化中,使用MgCl2激活基因编辑活性。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述植物为拟南芥,所述sgRNA对应的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
10.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述植物为烟草,所述sgRNA对应的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
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