[发明专利]转基因大豆WYN029GmA的检测方法

说明书

本发明涉及转基因大豆领域，具体涉及转基因大豆WYN029GmA的检测方法。本发明提供一种转基因大豆WYN029GmA转化事件外源插入载体位点及其左侧翼序列和右侧翼序列，并提供了检测转基因大豆的方法。本方案可以快速、高效、特异性地检测待测样品是否源自上述转基因大豆，在转基因大豆的检测以及种质资源的鉴定方面具有重要意义和广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及转基因大豆领域，具体涉及转基因大豆WYN029GmA的检测方法。

背景技术

自1996年首例转基因作物批准商业化至今，全球的转基因作物种植面积已经超过1.9亿公顷，较1996年增加了113倍，共有70多个国家应用。转基因大豆是产业化最早、应用率最高、种植面积最广、增长速度最大的转基因粮食作物，占全球转基因作物面积的50％。2018年我国进口大豆8803万吨，是转基因大豆最大的消费国家，因此大豆生产变得尤为重要，发展潜力巨大。我国大豆田中，中等草害的面积达50％以上，造成大豆损失约15％，草甘膦作为内吸灭生性除草剂，具有除草广谱、低毒低残等优点，是目前使用量最大的除草剂。抗草甘膦转基因大豆的应用，成功解决了田间除草问题，有利于大豆机械化与规模化生产。

AM79-EPSPS基因是从被草甘膦污染的土壤中直接分离提取土壤宏基因组DNA、构建基因组文库、利用EPSPS功能缺失突变株功能互补实验获得，是具有我国自主知识产权的新基因。该基因编码蛋白属于EPSPS，是一种全新的EPSPS蛋白。AM79-EPSPS蛋白不仅具有较高的草甘膦耐受性，而且保持与磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenolpyruvate,PEP)较强的亲和性，能够赋予植物对除草剂草甘膦的耐受性，本发明所用的mam79-epsps基因是将AM79-EPSPS基因根据大豆的密码子偏好性进行人工优化改造而成，是培育抗草甘膦转基因大豆的极佳选择。

根据全球转基因作物发展趋势，未来将有更多的转基因作物推广商业化生产，需要根据国家相关法规进行转基因作物检测，现有检测转基因大豆的方法主要是聚合酶链式反应或是核苷酸序列的探针杂交，且是对外源启动子、终止子、标记基因等，无法对不同转化体进行区分，若是对转基因材料进行全基因组序列，则需要高昂的测序费用且时间周期长，而蛋白层面的酶联免疫法需要的抗体和抗原制备困难，因此需要建立简单、方便、快捷的检测方法来鉴定特定的转基因事件。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种转基因大豆WYN029GmA的检测方法，该方法可以快速、高效、特异性地检测待测样品是否源自上述转基因大豆，在转基因大豆的检测以及种质资源的鉴定方面具有重要意义和广泛的应用前景。

本发明提供了大豆第18号染色体上第20546065位点在转基因大豆检测中的应用；所述转基因大豆包括WYN029GmA转基因大豆和/或由WYN029GmA为亲本育种而成的大豆。

本发明还提供了转基因大豆WYN029GmA外源基因插入位点的左侧翼核酸，所述左侧翼核酸具有如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

本发明提供了转基因大豆WYN029GmA外源基因插入位点的右侧翼核酸，所述右侧翼核酸具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

本发明还提供了所述的左侧翼核酸和/或所述的右侧翼核酸作为标志物，在制备转基因大豆检测试剂中的应用；所述转基因大豆包括WYN029GmA转基因大豆和/或由WYN029GmA为亲本育种而成的大豆。

本发明提供了转基因大豆检测试剂盒，包括：引物对A和/或引物对B；所述引物对A中，上游引物A靶向所述的左侧翼核酸；下游引物A靶向mam79-pC3301的T-DNA；

所述引物对B中，下游引物B靶向所述的右侧翼核酸；上游引物B靶向mam79-pC3301的T-DNA。

本发明提供了所述的检测试剂盒，所述引物对A包括具有如SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示的核苷酸序列的两条引物。