[发明专利]龙葵总皂苷在制备抗耐药性白血病药物中的应用

说明书

本发明公开了龙葵总皂苷在制备抗耐药性白血病药物中的应用，所述耐药性白血病为多药耐药性白血病，所述龙葵总皂苷的使用浓度大于10μg/mL。发明人利用白血病耐药细胞株裸鼠移植瘤模型，发现SN在体内具有较好的抗肿瘤活性，并通过体外测定SN对K562/ADR和K562细胞增殖的抑制作用，发现了其对细胞内周期、凋亡、自噬以及耐药等相关蛋白的表达情况，验证了其对自噬或相关通路对克服耐药以及细胞死亡产生的影响。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及龙葵总皂苷在制备抗耐药性白血病药物中的应用。

背景技术

肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致肿瘤化疗失败以及肿瘤复发的主要原因之一，其表现为当恶性肿瘤细胞对于一种化疗药物具有耐药性的同时，也会对多种其他具有不同结构和作用机制的化疗药物均产生耐药性。因此，如何克服肿瘤的多药耐药性是癌症治疗中的当务之急。

细胞自噬(autophagy)又被称作II型细胞程序性死亡，是机体细胞在压力条件下的自我保护机制，在癌症的治疗过程中普遍出现的现象。根据肿瘤细胞成分、治疗方式和所处微环境的变化，自噬对于多药耐药型肿瘤来说是一把双刃剑，它既可以参与肿瘤多药耐药性的发生并保护肿瘤细胞免受化疗药物的影响，但也可以诱导细胞发生过度自噬最终造成肿瘤细胞发生自噬性死亡。因此，调节自噬以克服肿瘤的多药耐药性是治疗各类型恶性肿瘤的新策略。但相关技术中，对于利用细胞自噬实现克服肿瘤的多药耐药性的技术尚未有公开。

龙葵(Solanum nigrum L)作为一种传统中药，具有多种生物学效应，其提取物具有显著的抗肿瘤作用。然而龙葵碱本身具有较强的细胞毒性，对于使用剂量以及使用方法具有较高的要求，从而极大的限制了其抗肿瘤方面的应用。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出龙葵总皂苷在制备抗耐药性白血病药物中的应用。发明人发现从龙葵中提取富集得到的总甾体皂苷(SN)具有抑制耐药性白血病细胞增殖的作用，从而能够作为一种新型的抗耐药性白血病药物，有效解决白血病耐药问题。

本发明的第一个方面，提供龙葵总皂苷在制备耐药性白血病药物中的应用。

在本发明中，发明人通过各种试验证明SN以浓度和时间依赖性的方式降低了K562和K562/ADR细胞的活力，说明SN能够有效杀伤一般白血病细胞和耐药性白血病细胞，具有一定的抗白血病耐药效果。

根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述耐药性白血病包括阿霉素耐药等多药耐药性白血病。

在本发明的一些优选实施方式中，所述龙葵总皂苷的使用浓度大于10μg/mL。

在本发明中，10μg/mL的龙葵提取物对K562/ADR细胞已具有显著的细胞毒性。除此之外，目前有关龙葵提取物克服肿瘤耐药的研究，尤其是龙葵提取物直接克服肿瘤耐药的研究寥寥无几。因此，对龙葵中甾体皂苷类成分进行深入的研究以寻找新型具有克服耐药作用的抗白血病药物是十分有必要的。

在本发明的一些更优选实施方式中，所述龙葵总皂苷的使用浓度大于20μg/mL。

在本发明中，发明人发现，20μg/mL的SN能够有效抑制K562/ADR中的BCRP、P-gp等耐药蛋白的表达，其抑制效果甚至强于阳性对照阿霉素，且通过该结果，可以表明SN是通过抑制BCRP、P-gp等耐药蛋白的表达来实现抑制K562/ADR细胞耐药性的效果。

根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述龙葵总皂苷的制备方法包括：

(1)使用60～70％乙醇加热回流2～4次提取龙葵青果，得到醇提液；

(2)除去醇提液中的乙醇，加水重悬后使用D101大孔树脂柱洗脱，收集洗脱液经浓缩干燥后即得。