[发明专利]黑素瘤细胞株及其制备方法

说明书

本发明公开了一种黑素瘤细胞株，黑素瘤细胞株内含有Rosa26‑Stop‑tdTomato报告基因、Tyr‑creER^T2基因、Braf^V600E和Pten^f/f基因，该黑素瘤细胞株的分类命名为小鼠黑素瘤细胞株ATBP，已于2022年2月9日将该细胞株保藏至中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:C202233。同时提供了黑素瘤细胞株的制备方法。本发明能够制备出一种遗传功能稳定的可以表达红色荧光蛋白，且含有Braf^V600E突变激活基因和Pten缺失基因的黑素瘤细胞株，便于医学研究。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种黑素瘤细胞株及其制备方法。

背景技术

皮肤恶性黑素瘤（简称MM）是皮肤科最致命的恶性肿瘤，由位于表皮基底层的黑素细胞发生恶变形成的。MM的产生是由遗传因素和环境因素相互作用导致的，通常黑素细胞容易发生突变形成MM的基因为BRAF、NRAS、TP53、PTEN、CDKN2A和KIT等，其中，黑素细胞中BRAF发生突变的概率为63%，PTEN发生缺失的概率为25%。

为了研究MM的发展过程，评估肿瘤药物治疗效果以及耐药机制等，常使用MM转基因小鼠进行研究。但是现有MM转基因小鼠的繁殖周期长，并且经过繁殖后其体内的黑素瘤基因并不稳定，影响研究的进程。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种黑素瘤细胞株及其制备方法，能够制备出一种遗传功能稳定的可以表达红色荧光蛋白，且含有Braf^V600E突变激活基因和Pten缺失基因的黑素瘤细胞株，便于医学研究。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供一种黑素瘤细胞株，黑素瘤细胞株内含有Rosa26-Stop-tdTomato基因、Tyr-creER^T2基因、Braf^V600E和Pten^f/f基因，所述黑素瘤细胞株的分类命名为小鼠黑素瘤细胞株ATBP，已于2022年2月9日将该细胞株保藏至中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:C202233。

黑素瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：

S1、选取同时携带Tyr-creER^T2、Braf^V600E、Pten^f/f基因的小鼠A，以及携带Rosa26-Stop-tdTomato基因的小鼠B，将所述小鼠A和所述小鼠B进行杂交，筛选得到携带Rosa26-Stop-tdTomato、Tyr-creER^T2、Braf^V600E、Pten^f/+基因的小鼠C；

S2、将所述小鼠C饲养至成年后与携带Pten^f/f基因的小鼠D进行杂交，筛选得到携带Rosa26-Stop-tdTomato、Tyr-creER^T2、Braf^V600E、Pten^f/f基因的小鼠E；

S3、通过对所述小鼠E进行诱导得到Rosa26-Stop-tdTomato表达、Tyr-creER^T2激活、Braf^V600E激活同时Pten基因缺失的小鼠F，所述小鼠F中即含有Rosa26-Stop-tdTomato、Tyr-creER^T2、Braf^V600E同时缺失Pten基因的黑素瘤细胞株。

优选的是，步骤S3中使用4羟基他莫昔芬对所述小鼠E进行诱导。

优选的是，步骤S3中在对所述小鼠E诱导之前将其背部的毛剔除。

优选的是，步骤S3中对所述小鼠E的诱导时间为30天。