[发明专利]一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗及其制备方法和应用。所述毒害艾美耳球虫亚单位疫苗包括毒害艾美耳球虫SAG13蛋白，所述毒害艾美耳球虫SAG13蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。本发明以毒害艾美耳球虫SAG13蛋白作为亚单位疫苗候选蛋白，深入分析其信号肽和跨膜结构域，创造性地去除信号肽和跨膜结构域的多肽序列，发现其能够有效激发鸡抵抗毒害艾美耳球虫感染的免疫保护力，即可作为高效亚单位疫苗，且序列显著简化，利于制备和纯化，能够实现高效、低成本制备，具有广泛推广应用的潜质。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

鸡球虫病是一种严重危害养禽业的原虫病，可以导致鸡采食量减少、营养不良、饲料转换率下降甚至死亡。其中毒害艾美耳球虫(E.necatrix)是7种鸡球虫中致病性最强的球虫之一。目前，鸡球虫病的防治主要以药物和疫苗为主，但随着耐药性的上升，药物防治的作用效果明显降低，所以疫苗预防变得更为重要。但目前市面上的疫苗难以应对毒害艾美耳球虫，主要是因为毒害艾美耳球虫的第1、2代裂殖生殖发生在小肠，第3代裂殖生殖和配子生殖发生在盲肠，分别与巨型和柔嫩艾美耳球虫的寄生部位相同从而存在拥挤效应，用鸡球虫病多价活虫疫苗免疫时，疫苗株的后代卵囊中毒害艾美耳球虫卵囊较少，较难形成完全的免疫保护力，故用鸡球虫病活疫苗免疫也难以防控毒害艾美耳球虫引发的疾病。因此，目前急需研发一种有效防控毒害艾美耳球虫的疫苗。

目前已应用的球虫疫苗主要为活疫苗，但活疫苗因为上述原因难以对毒害艾美耳球虫进行预防，难以满足生产需求。随着分子生物学的快速发展，新一代疫苗如亚单位疫苗的出现给疫苗研发提供了新方法，随着技术的发展与成熟逐渐在养殖行业发挥重要作用。亚单位疫苗含有病原体某种或多种特异性抗原，能够激发机体免疫应答的免疫原成分，但不具有在机体内复制和致病的能力，所以接种亚单位疫苗能够使鸡获得免疫保护力的同时不受活疫苗毒副作用的威胁，安全可靠。而目前已商用亚单位疫苗是使用艾美耳球虫的配子体抗原制备而成，如CN111514284A公开了一种鸡球虫多价重组蛋白疫苗及其制备方法和应用，所述鸡球虫多价重组蛋白疫苗包含4种鸡球虫蛋白：柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白41，柔嫩艾美耳球虫配子体蛋白22，巨型艾美耳球虫配子体蛋白56，和堆型艾美耳球虫裂殖子蛋白Ea3-1E，将上述4种鸡球虫蛋白分别与大肠杆菌表达载体相连获重组表达载体，表达重组蛋白，将不同种重组蛋白按比例与佐剂混合，免疫母鸡后的后代雏鸡接种球虫后与未免疫母鸡后代雏鸡相比，能够有效提高接种球虫的雏鸡存活率和相对增重，卵囊排出量减少，显示了良好的母源免疫效果，但生产耗时、难度较高，难以广泛推广应用。

综上所述，开发针对毒害艾美耳球虫的高效亚单位疫苗，简化工艺降低成本，对于鸡球虫病防治领域具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗及其制备方法和应用，本发明利用毒害艾美耳球虫SAG13蛋白作为亚单位疫苗，所述亚单位疫苗能够有效激发鸡抵抗毒害艾美耳球虫感染的免疫保护力，成分简单、易制备且整体成本低，具有广泛推广应用的潜质。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗，所述毒害艾美耳球虫亚单位疫苗包括毒害艾美耳球虫SAG13蛋白，所述毒害艾美耳球虫SAG13蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。

本发明中，以毒害艾美耳球虫SAG13蛋白作为亚单位疫苗候选蛋白，深入分析其信号肽和跨膜结构域，创造性地去除信号肽和跨膜结构域的多肽序列，发现其能够有效激发鸡抵抗毒害艾美耳球虫感染的免疫保护力，即可作为高效亚单位疫苗，且序列显著简化，更利于制备和纯化，能够实现高效、低成本制备，具有广泛推广应用的潜质。

SEQ ID NO.1：