[发明专利]基于固相萃取和比率荧光传感检测食品中组胺的方法

权利要求书

1.一种基于固相萃取和比率荧光传感检测食品中组胺的方法，其特征在于，所述的方法包括有以下步骤：

(1)采用共沉淀法制备镧系元素掺杂的六方相上转换纳米颗粒，再利用聚丙烯酸进行表面配体交换制备亲水性上转换纳米颗粒，获得亲水性上转换纳米颗粒的水分散液；

(2)基于固相萃取法对食品样品中的组胺进行分离得到待测溶液；

(3)将偶氮试剂甲液和偶氮试剂乙液混合；然后将待测溶液、亲水性上转换纳米颗粒水分散液、混合的偶氮试剂和Na₂CO₃溶液混合，使待测组胺与偶氮试剂充分反应产生有色的重氮偶联产物；

(4)基于荧光内滤效应，根据比率荧光变化进行快速定量检测。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的步骤(1)包括以下步骤：

(1-1)上转换纳米颗粒制备：以镧系元素氯化物为原料，油酸为配体，油酸、1-十八烯混合液为溶剂，在惰性气体保护、加热条件下剧烈搅拌至获得透明均一的溶液，冷却至不高于60℃；加入含有NaOH和NH₄F的甲醇溶液，在惰性气体保护下剧烈搅拌反应10-90min，除去甲醇后快速升温至250℃以上反应30-240min，冷却至室温，经分离、洗涤、干燥获得六方相上转换纳米颗粒；

(1-2)上转换纳米颗粒的表面改性：以聚丙烯酸为交换配体，一缩二乙二醇为溶剂，在惰性气体保护、加热条件下剧烈搅拌溶解获得透明均一的溶液，将步骤(1-1)上转换纳米颗粒的有机分散剂注入体系，继续升温至200-250℃，剧烈搅拌30-120min，冷却、分离、洗涤、干燥获得亲水性上转换纳米颗粒。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(1-1)中镧系元素氯化物包括YCl₃、GdCl₃、YbCl₃、TmCl₃、NdCl₃、ErCl₃、TmCl₃、HoCl₃或其水合物中的三种或三种以上的混合物。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中固相萃取使用强阴离子交换固相萃取柱。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)为：取食品样品，加入三氯乙酸溶液，样品均质后调pH，离心保留上清，将上清加至活化的强阴离子交换固相萃取柱上，然后淋洗固相萃取小柱，最后将组胺洗脱并收集。

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于：步骤(2)中上柱样品液的pH不小于8。

7.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于：步骤(2)中淋洗液pH不小于8。

8.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于：步骤(2)中组胺洗脱液pH不大于6。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中偶氮试剂甲液、乙液分别为1-10g/L的对硝基苯胺溶液和10-20g/L的亚硝酸钠溶液，两者混合比例为1:1～10；Na₂CO₃溶液浓度为50-200g/L，亲水性上转换纳米颗粒分散液浓度为0.1-5mg/mL，并且待测液、Na₂CO₃溶液、亲水性上转换纳米颗粒分散液和混合的偶氮试剂体积比为1:1～5:2～4:2～6，反应时间为5-60min。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)利用荧光内滤效应实现光学信号的转换和放大，比率荧光信号为490-580nm范围内发射峰值与640-780nm范围内发射峰值的比值作为比率荧光信号。