[发明专利]用于多环芳烃菲降解的人工混菌体系及其工程改造方法和应用

权利要求书

1.一类用于多环芳烃降解的人工混菌体系；其特征是，具体包括三种：

一是E.coli M123+P.putida KT-159；

二是E.coli M123+P.putida KT-AB；

三是E.coli M123+P.putida KT-ABRI。

2.用于多环芳烃降解的人工混菌体系工程改造方法，其特征是，人工混菌体系包括E.coli M123、P.putida KT2440、转入P.putida KT2440的三种表达载体p2-rhlABRI、p2-rhlAB-Tac及p2-rhlABRI-Tac、相关启动子、参与多环芳烃降解和产表面活性剂的关键基因；三种表达载体p2-rhlABRI、p2-rhlAB-Tac及p2-rhlABRI-Tac是经人工设计后交由生物工程有限公司合成；将公司合成的上述三个表达载体p2-rhlABRI、p2-rhlAB-Tac及p2-rhlABRI-Tac分别转化至P.putida KT2440中得到三种产鼠李糖脂的基因工程菌——P.putida KT-159、P.putida KT-AB及P.putida KT-ABRI。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是，包括如下步骤：

1)通过文献调研确定与合成鼠李糖脂的相关基因的核苷酸序列，包括rhlA、rhlB、rhlR和rhlI，对应的基因序列如SEQ ID No.1-4所示；

2)选择广宿主质粒pBBR1MCS-2质粒作为载体，在软件上将相关基因和质粒连接，得到表达载体p2-rhlABRI、p2-rhlAB-Tac及p2-rhlABRI-Tac质粒，相对应的核苷酸序列如SEQID No.5-7所示；

3)通过电击法将公司合成的上述三个表达载体p2-rhlABRI、p2-rhlAB-Tac及p2-rhlABRI-Tac转入P.putida KT2440中，分别得到具有鼠李糖脂合成功能的三种基因工程菌——P.putida KT-159、P.putida KT-AB及P.putida KT-ABRI(命名原则是：借鉴原始菌株P.putida KT2440的命名，159为随机数字，AB和ABRI分别代表基因rhlA、rhlB以及rhlA、rhlB、rhlR和rhlI)。

4.如权利要求3所述的方法，其特征是，p2-rhlABRI是质粒pBBR1MCS-2上连接有rhlA、rhlB、rhlR和rhlI四个基因；p2-rhlAB-Tac是质粒pBBR1MCS-2上连接有rhlA和rhlB这两个基因和Tac启动子；p2-rhlABRI-Tac是质粒pBBR1MCS-2上连接有rhlA、rhlB、rhlR和rhlI四个基因和Tac启动子。

5.权利要求1的用于多环芳烃降解的人工混菌体系在多环芳烃菲污染物降解中的应用。