[发明专利]一种在Rosa26位点定点敲入人源补体调节蛋白小型猪的制备方法有效

专利信息
申请号: 202210168461.4 申请日: 2022-02-24
公开(公告)号: CN114231533B 公开(公告)日: 2022-05-06
发明(设计)人: 秦川;卢天宇;邓守龙;杨博超;于佳楠;王若琳;徐亚新 申请(专利权)人: 中国医学科学院医学实验动物研究所
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/12;C12N15/85;C12N15/65;C12N15/55;C12N15/877;C12N15/90;A01K67/027
代理公司: 北京预立生科知识产权代理有限公司 11736 代理人: 朱萍
地址: 100021 *** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 rosa26 定点 敲入人源 补体 调节 蛋白 小型 制备 方法
【权利要求书】:

1.一种用于有效编辑猪ROSA26基因的sgRNA,其特征在于,所述sgRNA的编码序列如SEQID NO:4所示。

2.一种靶向猪Rosa26基因内含子1的CRISPR/Cas9系统表达载体,其特征在于,所述表达载体由权利要求1所述的sgRNA和骨架载体px330构成。

3.一种表达人源补体调节蛋白同源重组供体载体,其特征在于,所述同源重组供体载体包含5’端同源臂5’HA、EF1α启动子、人源补体调节蛋白基因hCRP、CMV启动子转录表达的新霉素抗性基因PKG-Neo、3’端同源臂3’HA和/或2A短肽;

所述人源补体调节蛋白基因包括hCD46、hCD55和/或hCD59;

所述2A短肽依次串联hCD46、hCD55和/或hCD59;

所述2A短肽包括T2A短肽和/或p2A短肽;

所述同源重组供体载体为表达hCD46的同源重组供体载体、同时表达hCD55和hCD59的同源重组供体载体或同时表达hCD46、hCD55和hCD59的同源重组供体载体;

所述表达hCD46的同源重组供体载体由5’HA、EF1α、hCD46、PKG-Neo、3’HA依次克隆在pGSI骨架载体得到;

所述同时表达hCD55和hCD59的同源重组供体载体由5’HA、EF1α、hCD55、p2A、hCD59、PKG-Neo、3’HA依次克隆在pGSI骨架载体得到;

所述同时表达hCD46、hCD55和hCD59的同源重组供体载体由5’HA、EF1α、hCD46、T2A、hCD55、p2A、hCD59、PKG-Neo、3’HA依次克隆在pGSI骨架载体得到;

所述5’HA的序列如SEQ ID NO:8所示;

所述EF1α的序列如SEQ ID NO:9所示;

所述hCD46的序列如SEQ ID NO:10所示;

所述T2A的序列如SEQ ID NO:11所示;

所述hCD55的序列如SEQ ID NO:12所示;

所述p2A的序列如SEQ ID NO:13所示;

所述hCD59的序列如SEQ ID NO:14所示;

所述PKG-Neo的序列如SEQ ID NO:15所示;

所述3’HA的序列如SEQ ID NO:16所示。

4.一种用于在Rosa26位点定点敲入人源补体调节基因的CRISPR/Cas9系统,其特征在于,所述CRISPR/Cas9系统包含权利要求2所述的表达载体和权利要求3所述的同源重组供体载体。

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