[发明专利]普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病相关蛋白的编码基因PvEXO70及应用

权利要求书

1.一种普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病相关蛋白的编码基因PvEXO70，其基因序列如SEQID NO.1所示。

2.一种如权利要求1所述的普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病相关蛋白的编码基因PvEXO70的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以普通菜豆为试材，分别在接种菜豆镰孢菌病原菌0、24、48、72、96和120h后于根组织采样并等量混合，用TRIZOL提取总RNA，用oligo(dT)纤维素分离纯化mRNA并合成cDNA；

2)以合成cDNA作为模板，设计如下引物利用RT-PCR方法分离普通菜豆中EXO70基因，引物序列如下：

EXO-F1：5’-AATCAGCGACTCTGGAAA-3’；

EXO-R1：5’-ATTTGGCAACCCTTCTAT-3’；

扩增获得大小为2700bp的扩增片段即为普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病相关蛋白的编码基因PvEXO70。

3.一种如权利要求1所述的普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病相关蛋白的编码基因PvEXO70在提高普通菜豆抵抗镰孢菌枯萎病性能上的应用，其特征在于，具体步骤如下：

1)构建PvEXO70基因沉默载体

采用BamHI和MscI双酶切方法将PvEXO70基因开放阅读框中442bp序列片段导入pG7R2V载体中，构建基于VIGS技术的基因沉默载体pG7R2V-PvEXO70；

2)获得PvEXO70基因沉默菜豆植株

将pG7R2V-PvEXO70与pGHopR1载体的体外转录产物等量混合后接种普通菜豆植株首片三出复叶，培养条件为28℃光照16h/25℃黑暗8h，获得PvEXO70基因沉默菜豆植株。