[发明专利]一种BNP荧光定量检测试纸条、试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种BNP荧光定量检测试纸条、试剂盒及其制备方法，涉及医学体外辅助技术领域。其包括在基板上沿层析方向依次设置的结合垫、样品垫、检测膜和吸收垫；结合垫上包被有标记BNP检测抗体的荧光微球，且检测膜上分别设有包被抗BNP的捕获抗体的检测线、包被X抗YIgG抗体的质控线。当结合垫上包被有标记BNP检测抗体的荧光微球时，沿层析方向，将结合垫设置于样品垫之前，可以增大BNP抗原与BNP检测抗体‑荧光微球的偶联物在整个试纸条上的层析距离，从而有利于BNP抗原与BNP检测抗体充分反应，进而使得后续的检测膜上的抗体能够更好地与层析至检测膜上的BNP抗原高亲和力结合，提高检测的灵敏度。

技术领域

本发明涉及医学体外辅助技术领域，具体而言，涉及一种BNP 荧光定量检测试纸条、试剂盒及其制备方法。

背景技术

B型钠尿肽(BNP)，是主要由心脏分泌的利尿钠肽家族的一员，由32个氨基酸残基组成的多肽。BNP是目前最有价值的心衰诊断生物标志物，可用于多种类型的心衰诊断，包括无症状性心衰、慢性失代偿性心衰和急性失代偿性心衰。目前多推荐，BNP＜100pg/mL可用于排除急性代偿性心衰的诊断，有较高的阴性预测值；BNP≥ 35～100pg/mL定为心衰的诊断界值，而BNP大于400pg/mL值应考虑心衰的诊断。

目前，定量检测BNP的方法有放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、侧向流免疫层析法。相较于其他方法，侧向流层析法具有成本低、操作简单、快捷、方便携带等优点，是医学体外诊断领域重要的一部分。同时，鉴于BNP辅助诊断心衰的意义，开发一种高灵敏度、高精密度的BNP免疫荧光定量检测试纸条具有广阔的市场价值。

目前市面上的BNP免疫荧光定量检测试纸条能达到极低检测限的必要条件是：在纤维膜上的抗体标记生物素和荧光素链霉亲和素的偶联物或标记荧光素、量子点等方法，通过信号放大等方法实现高灵敏度的检测。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不依赖化学发光素、荧光素的BNP 免疫荧光定量试纸条。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种BNP荧光定量检测试纸条，其包括在基板上沿层析方向依次设置的结合垫、样品垫、检测膜和吸收垫；结合垫上包被有标记BNP检测抗体的荧光微球，且检测膜上分别设有包被抗 BNP的捕获抗体的检测线、包被X抗YIgG抗体的质控线，X选自羊、鸡、马、猴、鼠、兔或猪，Y选自羊、鸡、马、猴、鼠、兔或猪，且X与Y不同。

发明人创造性地发现，当结合垫上包被有标记BNP检测抗体的荧光微球时，沿层析方向，将结合垫设置于样品垫之前，可以增大 BNP抗原与BNP检测抗体-荧光微球的偶联物在整个试纸条上的层析距离，从而有利于BNP抗原与BNP检测抗体充分反应，进而使得后续的检测膜上的抗体能够更好地与层析至检测膜上的BNP抗原高亲和力结合，提高检测的灵敏度。

发明人意外地发现，在基板上沿层析方向依次设置的结合垫和样品垫，可以降低试纸条的测试值的变异系数，有助于改善试纸条的精密度，提高批内或批间的测试精度。

在一种可选的实施方式中，上述质控线上包被的抗体为羊抗鼠 IgG抗体。

上述荧光微球包括不限于聚苯乙烯微球，例如绿色、彩色、橙色、蓝色等荧光微球。粒径为50-400nm。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述样品垫的数目为1个，且结合垫的下边缘与样品垫一端的上边缘搭接，样品垫另一端的下边缘与检测膜的上边缘搭接。

发明人发现，这种搭接结构的试纸条相较于其他的搭接结构的试纸条具有检测信号强度高、检测信号变异系数小的技术优势，其变异系数最低小于10％，精密度得到明显地改善。此外，本发明提供的检测试纸条检出限极低(达到10pg/mL)，达到或超出常规的化学发光素、荧光素级联放大后的检测水平。线性检出范围为15-5000pg/mL。