[发明专利]重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用

说明书

本发明涉及一种重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用；属于生物工程和免疫学技术领域，所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述重组鞭毛蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述重组载体包括表达载体和所述重组鞭毛蛋白的基因；所述表达载体为原核表达载体pET32a；所述重组菌包括宿主细菌和所述重组载体；所述宿主细菌为Rosetta工程菌株。本发明的重组鞭毛蛋白制备的疫苗对哈维氏弧菌的免疫保护率达83.77％。

技术领域

本发明属于生物工程和免疫学技术领域，具体涉及一种重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用。

背景技术

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)能引起多种海水养殖鱼类的病害，而且弧菌性疾病发病迅速、控制困难，对渔业生产造成严重的经济损失。在哈维氏弧菌的防治中，抗生素为主要的防治方法，但是容易产生耐药性，而且还会破坏环境微生态。免疫防治药效维持的时间长、还能避免产生耐药性，具有很好的发展前景。

鞭毛是附着在菌体上呈细长波状弯曲的丝状体，是细菌的运动器官，与致病性有关。鞭毛自细胞膜长出，游离于菌细胞膜外，有基础小体、钩状体和丝状体三个部分组成。由菌体内形成的鞭毛蛋白分子不断地添加到鞭毛的末端堆积而形成。鞭毛蛋白单体(flagellin，30-60kDa，基于细菌分类群)由鞭毛蛋白输出系统从细菌中分泌出来。由于鞭毛蛋白在各种细菌物种中广泛存在，且在单个细菌细胞中含量丰富，细菌鞭毛在侵染过程中发挥了重要作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用；

所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述重组鞭毛蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述重组载体包括表达载体和所述重组鞭毛蛋白的基因；所述表达载体为原核表达载体pET32a；

所述重组菌包括宿主细菌和所述重组载体；所述宿主细菌为Rosetta工程菌株。

一种抗哈维氏弧菌药物，包括重组鞭毛蛋白；所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明与现有技术相比的有益效果：

1.保护性强，本发明利用所述重组鞭毛蛋白制备的亚单位疫苗对哈维氏弧菌的免疫保护率达83.77％。

2.安全性高，不含有感染性组分，但可以诱导机体产生保护性的免疫力。

3.为哈维式弧菌的病害防治提供了新途径。

附图说明

图1是哈维氏弧菌鞭毛蛋白基因的PCR扩增产物于2％琼脂糖凝胶中的电泳图，M:DNA Marker DL2000；1：鞭毛蛋白基因的PCR扩增产物；

图2是重组鞭毛蛋白表达的SDS-PAGE检测图，1：未诱导重组全菌；2：诱导后重组菌；3：pET-32a诱导全菌；M:蛋白Marker；

图3是重组蛋白纯化后的鞭毛蛋白检SDS-PAGE测图，1：重组蛋白纯化后的鞭毛蛋白；2：纯化后的pET-32a；M:蛋白Marker；

图4是接种疫苗四周后的攻毒实验数据统计结果。

具体实施方式

实施例1T1-Simple-B质粒构建

取保存的哈维氏弧菌活化培养后转接，30℃，180rpm震荡培养16小时。