[发明专利]用于从样本中提取核酸的方法和试剂盒

说明书

本公开涉及用于从样本中提取核酸的方法，包括以下步骤：(a)使裂解组合物、样本以及固相载体混合，以使所述固相载体结合从所述样本中释放的核酸，得到经结合的固相载体；(b)清洗所述经结合的固相载体，以得到经清洗的固相载体；和(c)对所述经清洗的固相载体进行洗脱，以释放核酸；其中，所述方法中不使用有机溶剂，诸如苯酚、氯仿、异丙醇、乙醇、聚乙二醇。本公开的方法可有效避免使用有机溶剂、缩短提取时间并降低成本。

技术领域

本公开涉及核酸提取技术领域，更具体涉及用于从样本中提取核酸的方法和试剂盒。

背景技术

核酸提取是分子生物学常用的技术，是从复杂样本得到高纯度核酸的过程。核酸提取的通常流程包括1.细胞裂解，即将核酸从细胞或其他生物体(比如病毒)中释放出来；2.核酸分离和纯化。核酸分离和纯化的方法常用的包括：抽提与沉淀法、柱提取和磁珠法提取。抽提与沉淀法指的是采用有机溶剂(如酚氯仿，Tizol)反复抽提，离心后分层，核酸位于上层水相，而变性的蛋白大多在中间层，下层有机相含有脂类等杂质。小心吸取水相后，加入乙醇沉淀核酸，70％乙醇清洗后可得到较纯的核酸，加入TE或无核酸酶水溶解即得到核酸。柱提取法利用的是硅胶膜在高盐低pH时选择性吸附核酸，而在低盐高pH时释放核酸的特征进行核酸分离，而杂质的清洗需要用到含乙醇的漂洗液。磁珠法提取是利用磁珠作为固相载体吸附核酸，通常结合过程会使用异丙醇或则聚乙二醇，而清洗磁珠杂质需要用到高比例的乙醇(常用70％-80％)。

然而，核酸提取现有的技术，无论是上述哪种方法，都需要使用到有机溶剂，如苯酚、氯仿、异丙醇、乙醇、聚乙二醇等。然而，有机溶剂大多有毒性或者运输储存受限，这对日常实验人员带来风险和不便。并且，核酸清洗使用有机溶剂后需要时间挥发以免影响核酸纯度，这个等待挥发的时间通常需要5分钟，这个时间看起来不长，但在大量样本需要处理时(比如新冠检测每天需要提取大量样本)也会浪费时间。

因此，非常需要开发一种新的用于从样本中提取核酸的方法，以避免使用有机溶剂、缩短提取时间并降低成本。

发明内容

通过核酸提取方法中组分、试剂使用浓度和体积、反应体系、反应程序、操作流程的优化，可以解决上述问题。

根据本公开的第一方面，其提供用于裂解样本的组合物，其包含：

离液盐；

去垢剂；

缓冲液；和

水；

其中，所述离液盐在所述组合物中的浓度为接近其饱和浓度，例如为4M-7M；

所述去垢剂在所述组合物中的浓度为0.1％-10％(v/v)，优选0.5％-8％，更优选1％-5％；

所述缓冲液在所述组合物中的浓度为10mM-100mM；并且

其中所述组合物不包含有机溶剂，诸如苯酚、氯仿、异丙醇、乙醇、聚乙二醇。

在一种实施方案中，所述离液盐选自下组中的至少一种：盐酸胍、异硫氰酸胍、异硫氰酸胍盐、盐酸胍和尿素。

在一种实施方案中，所述离液盐为4M盐酸胍和3M异硫氰酸胍；或

所述离液盐为4M盐酸胍和5M异硫氰酸胍盐；或

所述离液盐为7M盐酸胍；或

所述离液盐为4M-5M盐酸胍和5M-6M尿素；或

所述离液盐为3M-4M异硫氰酸胍和5M-6M尿素；或

所述离液盐为5M异硫氰酸胍。

在一种实施方案中，所述去垢剂选自下组中的至少一种：吐温-20、NP40和TritonX-100，优选吐温-20。