[发明专利]一种海南省火焰兰SSR分子标记引物组及其应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，具体公开了一种海南省火焰兰SSR分子标记引物组，所述SSR分子标记包括(TTG)6‑26、(TTG)6‑27、(TAA)19‑45、(AAT)16‑47、(AAC)14‑68、(CTC)10‑81、(TTG)10‑96、(TTA)11‑106、(TAT)10‑114、(AAT)13‑117、(CTT)10‑119、(CTT)6‑141、(CAT)6‑159、(GAA)6‑184、(ATA)6‑198、(TTA)6‑218和(ATA)6‑242中的一个或两个以上；还包括用于扩增SSR分子标记物的引物。本发明还公开了上述海南省火焰兰SSR分子标记引物组的应用。本发明对海南省火焰兰开展三代转录组测序，挖掘SSR(simple sequence repeat)信息，开发一批多态性高的SSR分子标记引物，为开展海南省火焰兰种群遗传多样性评价，揭示其种质资源遗传变异及种群居群结构，对海南省火焰兰种质资源的保护与创新利用提供重要的科学依据。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种海南省火焰兰SSR分子标记引物组及其应用。

背景技术

火焰兰(Renanthera coccinea)为兰科万代兰族(Vandeae)指甲兰亚族(Aeridinae)火焰兰属 (Renanthera)植物，以其绚丽如火的花色而得名，是极具特色和观赏价值的一类热带珍稀兰花。火焰兰具有花序呈大圆锥型，花小数量多，花期长，花梗长，耐高温、高湿，喜阳等特点，可广泛用于切花、园林布景、绿篱和盆栽等方面。火焰兰属约有20个种，主要分布于亚洲的热带地区和太平洋岛屿。我国有云南火焰兰(R.imschooliana)、火焰兰和中华火焰兰(R.sinica)3种，主要分布于云南、贵州、海南等地。

调查显示，近年来随着海南省房地产和热带农业的大肆发展，大量山林和灌木林被毁，火焰兰的生存环境遭到严重破坏，加之不法花商为谋取暴利而进行的掠夺式采挖，使海南省火焰兰种群数量急剧下降，有的地区已难觅踪迹，亟待保护，如野生云南火焰兰的分布范围狭窄、数量极少，且近年来遭到严重采挖，致使其野生种质资源濒临灭绝，现已被列入《中国生物多样性红色名录—高等植物卷》的极危物种和《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录I物种。

目前，国内外对火焰兰的研究还主要集中在对云南火焰兰的离体快速繁殖(林丹妮等，2006)，种子无菌萌发和试管育苗(林丹妮等，2008)，杂交育种(曹雯静等，2014；陈和明等，2019)，通过查阅文献、标本记录、实地群落及种群现状调查相结合的方法来分析火焰兰的种群现状(李娟等，2018) 等方面。研究人员对海南省火焰兰资源的研究可能比较晚，仅发现在2015年才有报道，如姚婧通过相关序列扩增多态性(sequence-relatedamplified polymorphism,SRAP)技术对8份海南省火焰兰栽培资源进行了遗传多样性分析(姚婧，2015)，但是此项研究样本量比较少，而且样本并非海南省野生资源，同时SRAP标记的物种特异性不具优势，因此，不能反应整个海南省火焰兰的种质资源情况。采用一种准确且多态性比较高的分子标记对海南省火焰兰资源进行遗传多样性分析迫在眉睫。

SSR(simple sequence repeat)分子标记具有多态性高、标记数量多、重复性好、覆盖面广等优点，已广泛应用于分子标记辅助选择、遗传多样性分析和遗传图谱构建等领域。