[发明专利]转基因小鼠

说明书

本发明涉及用于在小鼠中表达产生仅有重链的抗体和V_H结构域的核酸构建体、转基因小鼠、相关的方法和应用。

本申请是国际申请日为2014年10月22日、国际申请号为PCT/GB2014/053146于2017年3月31日进入中国国家阶段、申请号201480082416.0、发明名称“转基因小鼠”的申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及用于在小鼠中表达的核酸构建体。本发明还涉及这些构建体在产生仅有重链的抗体中的应用，所述仅有重链的抗体例如，在轻链(L-链)和重链(H-链)基因座的表达方面受损(compromised)的小鼠中产生。本发明还涉及来源于所述仅有重链的抗体的单个V_H结构域的分离和应用。

引言

大部分天然抗体或免疫球蛋白(Ig’s)通常包含两条重(H)链和两条轻(L)链。H-链通过位于柔性铰链结构域附近的二硫键彼此连接，并且每条H-链具有与其N端区域键合的L-链二硫化物，从而形成H₂L₂异四聚体。每条L-链具有可变(V_L)结构域和恒定(C_L)结构域，而每条H-链包含可变结构域(V_H)、第一恒定结构域(C_H1)、铰链结构域和两个或三个另外的恒定结构域(C_H2、C_H3以及任选地C_H4)。在正常的二聚体抗体(H₂L₂)中，每个V_H与V_L结构域的相互作用形成抗原结合区(还已知在C_H1结构域与C_L结构域之间的相互作用促进重链与轻链之间的功能性缔合)。

已知几种不同种类的天然Ig。这些种类(或同种型)的区别在于它们H-链的恒定结构域，其又影响Ig的功能。在哺乳动物中，五种Ig同种型为IgA，IgD，IgE，IgG和IgM。IgA包含由C_α基因节段编码的C_H结构域，并且在粘膜免疫中起主要作用。分泌性的IgA是含有通过一个J链连接的两个H₂L₂单位的二聚体，并且通常大量存在于分泌物中，如乳汁和初乳中。血清IgA以H₂L₂单体存在于人中。IgD包含由C_δ基因节段编码的C_H结构域，是单体的，并且作为B细胞(即，负责产生抗体的细胞)上的抗原受体起作用。IgE具有由C_ε基因节段编码的C_H结构域，也是单体的，并且在与肥大细胞上的高亲和性Fcε受体结合时，能够由引发细胞因子和组胺释放(变态反应)的变应原交联。在人中，IgG以四种不同的亚型存在，全部这些亚型都是单体的并且包含由C_γ基因节段编码的C_H结构域。IgG同种型包括大部分基于成熟抗体的(体液)免疫应答。最后，IgM具有由C_μ基因节段编码的C_H结构域，并且(类似于IgG，A和E)在B细胞表面上表达并且还以分泌形式表达。分泌的IgM是五聚体的并且作为早期体液应答的一部分在清除病原体中起关键作用。