[发明专利]一种产地黄源红景天苷酵母工程菌的构建及应用

权利要求书

1.一种地黄源红景天苷表达载体，其特征在于，

所述表达载体包括酪氨酸脱羧酶基因RgTyDC表达模块，铜胺氧化酶基因RgCuAO表达模块，乙醇脱氢酶基因RgADH表达模块，UDP-葡萄糖糖基转移酶基因RgUGT表达模块和f1 ori-2µori-URA-Amp-ori组合元件线性模块；

所述酪氨酸脱羧酶基因RgTyDC表达模块包括组成型启动子、RgTyDC基因和终止子；RgTyDC基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述铜胺氧化酶基因RgCuAO表达模块包括组成型启动子、RgCuAO基因和终止子；RgCuAO基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述乙醇脱氢酶基因RgADH表达模块包括组成型启动子、RgADH基因和终止子；RgADH基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述UDP-葡萄糖糖基转移酶基因RgUGT表达模块包括组成型启动子、RgUGT基因和终止子；RgUGT基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述f1 ori-2µori-URA-Amp-ori组合元件线性模块包括f1ori、2µ ori、URA3基因、氨苄青霉素抗性基因和pUC ori。

2.根据权利要求1所述的一种地黄源红景天苷表达载体，其特征在于，

用组成型启动子P_TEF启动RgTyDC基因的表达；P_TEF核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

用组成型启动子P_PGI启动RgCuAO基因的表达；P_PGI核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

用组成型启动子P_TPI1启动RgADH基因的表达；P_TPI1核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

用组成型启动子P_PHX7启动RgUGT基因的表达；P_PHX7核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

3.根据权利要求1所述的一种地黄源红景天苷表达载体，其特征在于，

所述酪氨酸脱羧酶基因RgTyDC表达模块的终止子为T_TEF，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述铜胺氧化酶基因RgCuAO表达模块的终止子为T_GAL2，核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

所述乙醇脱氢酶基因RgADH表达模块的终止子为T_PKF1，核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；

所述UDP-葡萄糖糖基转移酶基因RgUGT表达模块的终止子为T_PGI，核苷酸序列如SEQ IDNO.12所示。

4.权利要求1-3任一项所述的一种地黄源红景天苷表达载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将启动子、目的基因与终止子连接成表达模块，分别形成所述酪氨酸脱羧酶基因RgTyDC表达模块、所述铜胺氧化酶基因RgCuAO表达模块、所述乙醇脱氢酶基因RgADH表达模块和所述UDP-葡萄糖糖基转移酶基因RgUGT表达模块；

（2）以pYES-DEST52载体为模板，克隆f1 ori-2µ ori-URA-Amp-ori组合元件线性模块；

（3）所述酪氨酸脱羧酶基因RgTyDC表达模块、所述铜胺氧化酶基因RgCuAO表达模块、所述乙醇脱氢酶基因RgADH表达模块、所述UDP-葡萄糖糖基转移酶基因RgUGT表达模块与所述f1 ori-2µori-URA-Amp-ori组合元件线性模块利用缝克隆酶完成连接；

（4）连接产物转化大肠杆菌DH5α，挑选并验证阳性克隆，提取质粒。

5.一种产地黄源红景天苷酵母工程菌，其特征在于，

以酵母BY4741为原始菌株，表达SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4所示基因。