[发明专利]一种人精子膜蛋白SPACA1特异性抗原偶联蛋白与抗体的制备方法

权利要求书

1.一种N端人精子膜蛋白SPACA1特异性多肽，其特征在于抗原结合位点位于人精子顶体区外膜，多肽序列为人精子膜蛋白SPACA1氨基酸序列中第61位到第74位氨基酸的肽段，并在C端加上半胱氨酸(C)，多肽的氨基酸序列为：NYAPPETEDVSNRNC。

2.一种人精子膜蛋白SPACA1特异性抗原偶联蛋白，其特征在于为合成抗原多肽NYAPPETEDVSNRNC通过交联剂将多肽氨基酸疏基与匙孔血蓝蛋白(KLH)氨基共价交联的混合物。

3.一种抗人精子膜蛋白SPACA1的抗体制备方法，其特征在于包括：

1)、人精子膜蛋白SPACA1特异性抗原表位的分析与设计；

2)、人精子膜蛋白SPACA1特异性抗原偶联蛋白的制备和纯化；

3)、制备人工免疫原免疫动物；

4)、收集抗体血清；

5)、饱和硫酸铵法分离纯化抗人精子膜蛋白SPACA1IgG抗体；

6)、酶联免疫吸附实验鉴定血清抗体与天然人SPACA1蛋白结合效价；

7)、细胞免疫荧光染色定位精子表面SPACA1蛋白分布。

4.根据权利要求3所述的抗体制备方法，其特征在于所述特异性抗原表位的分析与设计是利用生物信息软件对蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，主要评估跨膜片段、多肽活性、亲水性和抗原性指数；所确定的胞外特异性抗原表位序列为人精子膜蛋白SPACA1氨基酸序列中第61位到第74位氨基酸的肽段，并在C端加上半胱氨酸(C)，多肽的氨基酸序列为：NYAPPETEDVSNRNC。

5.根据权利要求3所述的抗体制备方法，其特征在于所述偶联蛋白为匙孔血蓝蛋白(KLH)。

6.根据权利要求3所述的抗体制备方法，其特征在于所述人工免疫原为权利要求2所述人精子膜蛋白SPACA1特异性抗原偶联蛋白与完全或不完全弗氏佐剂混合免疫动物。

7.根据权利要求3所述的抗体制备方法，其特征在于所述免疫动物为在实验动物背部通过多点皮下注射，并经二次以上加强免疫，与人精子膜蛋白提取物反应血清效价大于1：3200。

8.根据权利要求3所述的抗体制备方法，其特征在于所述分离纯化抗人精子膜蛋白SPACA1IgG抗体是经过硫酸铵沉淀、蛋白亲和纯化能够从抗体血清中获得高纯度的IgG抗体。