[发明专利]非动物源性培养基及用其培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的方法

说明书

本发明涉及一种非动物源性培养基及用其培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的方法，非动物源性培养基包含5g/L‑12g/L N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖、25g/L‑40g/L大豆蛋白胨、12g/L‑20g/L酵母浸粉、2g/L‑5g/L磷酸二氢钾、1g/L‑4g/L碳酸钠以及水。采用该非动物源性培养基培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的过程中，嗜黏蛋白阿克曼氏菌增殖快。并且采用该非动物源性培养基培养的嗜黏蛋白阿克曼氏菌生长状态好，安全性好，易操作和控制，培养时长短，满足作为药用价值的工业要求。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种非动物源性培养基及用其培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的方法。

背景技术

嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila，以下简称嗜黏蛋白阿克曼氏菌)隶属疣微菌门，是一种革兰氏阴性菌。嗜黏蛋白阿克曼氏菌广泛分布于人类和动物的肠道黏液层中，是肠道高丰度共生菌之一。嗜黏蛋白阿克曼氏菌是人体肠道中一种可降解黏蛋白的细菌，能够以黏蛋白作为唯一碳源、氮源和能量来源，并在酵解过程中产生乙酸盐、乙醇、丙酸盐和硫酸盐。经研究发现，嗜黏蛋白阿克曼氏菌与多种系统疾病如肥胖、糖尿病、免疫调节、酒精性脂肪肝和冠状动脉硬化等均有一定关联，其含量是衡量肠道微生态平衡的重要标志物微生物之一。由于近年对嗜黏蛋白阿克曼氏菌生理功能的一系列重要发现，尤其是在肿瘤免疫疗法中的重要作用，使其被誉为具有重大应用及开发价值的“二代益生菌(NGP)”——生物活体治疗性药物(LBP)的重要候选菌株，作为新型候选益生菌，嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养显得尤为重要。

传统的用于培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基含有动物源成分，包括采用牛脑心浸液琼脂干粉和猪胃黏蛋白配制而成的培养基，以及哥伦比亚液体培养基(ColumbiaBroth,CB)和脑心浸液液体培养基(Brain Heart Infusion,BHI)。虽然培养的效果尚可，但是成本较高，而且脑心浸液琼脂干粉和猪胃黏蛋白都来自于动物组织或消化物，来源于动物的成分可能含有病毒、朊病毒或细菌来源的污染物，或含有抗敏原、抗原肽或其他不期望的成分，还可能会携带未知的病毒和其他危险成分，因此，动物源成分的培养基的安全性无法得到充分保障。

已经有文献报道(Plovier H,Everard A,Druart C,et al.A purified membraneprotein from Akkermansia muciniphila or the pasteurized bacterium improvesmetabolism in obese and diabetic mice.[J].Nature Medicine,2016,23(1):107)嗜黏蛋白阿克曼氏菌的合成培养基(非动物源)，其包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖和N-乙酰-D-氨基葡萄糖。但是用该文献报道的培养基进行嗜黏蛋白阿克曼氏菌的扩增培养，不能够快速增殖培养得到嗜黏蛋白阿克曼氏菌。另在现有非动物源培养基配方中，有研究报道将黏蛋白用氨基酸替代，但此方法获得的非动物源培养基配方成分种类复杂、嗜黏蛋白阿克曼氏菌生长缓慢。传统的用于嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养的非动物源性培养基再例如：CN110079474A公开的培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基该培养基利用特定氨基酸组合替代培养基中天然组成氮源(如蛋白胨、酵母抽提物等)，进而实现利用全单质培养基，利用该培养基不添加牛脑心浸液琼脂干粉和猪胃黏蛋白。CN109810931A公开的培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基，以水为溶剂，每升包括：20-45mmol葡萄糖、12-32g大豆蛋白胨、3-8g苏氨酸、20-35mmol N-乙酰葡糖胺、4-6g氯化钠和2-3.5g磷酸氢二钠

然而，采用如上举例的传统的用于嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养的非动物源性培养基，嗜黏蛋白阿克曼氏菌增殖慢，难以满足产业化需求。

发明内容

基于以上技术问题，本发明的目的之一是提供一种非动物源性培养基，采用该非动物源性培养基培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的过程中，嗜黏蛋白阿克曼氏菌增殖快。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：