[发明专利]一种可在全自动生化分析仪上进行人血清中农药检测的试剂盒

说明书

本发明涉及农药检测技术领域，提供了一种可在全自动生化分析仪上进行人血清中农药检测的试剂盒，包括试剂1、试剂2和试剂3，所述试剂1包括胆碱酯酶、铁氰化钾，所述试剂2包括丁酰硫代胆碱，所述试剂3包括可使人血清中胆碱酯酶失活的物质。本发明以胆碱酯酶抑制法为原理，通过前处理将血清中胆碱酯酶灭活处理，从而实现在全自动生化分析仪上进行血清中农药的检测，大大缩短检测时间，提高检测效率及降低检测成本，同时精准度高，试剂稳定性好。本发明可对人血清中敌敌畏、氧乐果、甲胺磷、丙溴磷、克百威、甲萘威等农药进行检测，检测范围广，结果稳定可靠。

技术领域

本发明涉及农药检测技术领域，尤其涉及一种可在全自动生化分析仪上进行人血清中农药检测的试剂盒。

背景技术

目前，农药的主要检测方法为胆碱酯酶抑制法和气相色谱-质谱法，其中胆碱酯酶抑制法主要用于果蔬农残检测，通过对果蔬叶片残留农药进行提取，加入到配制好的反应液中进行显色反应，通过紫外分光光度计进行吸光度测定，判断农药含量；人血清中农药检测主要是气相色谱-质谱法，通过对血清进行沉淀离心、萃取、提纯浓缩、复溶最后注入气相色谱-质谱进行检测。两种方法操作步骤多为手动操作处理，过程较繁琐。

鉴于农药的剧毒性及其对环境和人类健康的巨大威胁，发展高效率和高准确性的农药残留检测方法尤为重要。

发明内容

本发明旨在至少克服上述现有技术的缺点与不足其中之一，提供一种可在全自动生化分析仪上进行人血清中农药检测的试剂盒。本发明目的基于以下技术方案实现：

本发明提供了一种可在全自动生化分析仪上进行人血清中农药检测的试剂盒，包括试剂1、试剂2和试剂3，所述试剂1包括胆碱酯酶、铁氰化钾，所述试剂2包括丁酰硫代胆碱，所述试剂3包括可使人血清中胆碱酯酶失活的物质。

本发明的反应原理及设计思路如下：

1)反应原理

丁酰硫代胆碱+胆碱酯酶——硫代胆碱

硫代胆碱+铁氰化钾——亚铁氰化钾(铁氰化钾在405nm有吸光度，随着铁氰化钾消耗，吸光度降低)

农药可抑制胆碱酯酶的活性，减弱后面的反应。

2)设计思路

该试剂盒校准品以灭活的血清为基质，加入不同浓度梯度的农药作为校准品，进行定标，检测时血清样本同样进行灭活处理，除去血清中的胆碱酯酶干扰，然后进行检测。

优选地，所述试剂1中胆碱酯酶的浓度为5～15ku/L，铁氰化钾的浓度为1～3g/L，所述试剂2中丁酰硫代胆碱的浓度为1～3g/L。

优选地，所述试剂1中胆碱酯酶的浓度为10ku/L，铁氰化钾的浓度为2g/L，所述试剂2中丁酰硫代胆碱的浓度为2g/L。

优选地，所述试剂3包括丙酮或0.3～0.6g/L的叠氮钠的丙酮溶液。叠氮钠具有优良的防腐杀菌性能，可用于防酶，血清防腐。

优选地，所述试剂1与试剂2的体积比例为3.5～4.5：1。

优选地，本发明的试剂盒的使用方法包括以下步骤：

S1、在人血清中加入试剂3，混匀后静置一段时间使血清中胆碱酯酶失活，离心取上清；

S2、在上清中加入试剂1和试剂2反应一段时间，其中，试剂1、试剂2与上清的体积比例为3.5～4.5：1：0.1～0.2；

S3、反应结束后，读取反应液的吸光度，与定标曲线对比得到农药含量。

优选地，所述定标曲线的绘制方法包括：

1)取不同浓度梯度的农药，分别加入正常血清中，配制得到一系列标准品，加入试剂3，混匀后静置一段时间，离心取上清；