[发明专利]一种重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47及其制备方法和用途

说明书

本发明属于多肽药物技术领域，涉及一种重组融合蛋白TAT‑mCNTF‑CD47及其制备方法和用途，所述重组融合蛋白TAT‑mCNTF‑CD47的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明的重组融合蛋白TAT‑mCNTF‑CD47能够作用于小鼠肥胖模型，达到减脂减重的目的，为制备减肥药物提供了理论依据。

技术领域

本发明属于多肽药物技术领域，涉及一种重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47及其制备方法和用途。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)反式转录激活因子(trans-activator of transcription,TAT)富含碱性氨基酸序列，能够高效介导外源多肽及蛋白质等生物大分子通过膜性结构，如细胞质膜和血脑屏障等。将TAT与靶蛋白共价相连，可以使靶蛋白直接穿过细胞膜，进入细胞或在周围细胞间传递，该过程不依赖于受体与转运蛋白，被转导入细胞内的外源蛋白保留其原有的生物活性与功能，与温度等无关，对宿主细胞几乎无毒性。这种由TAT携带靶蛋白跨过细胞膜，进入细胞质的过程称为蛋白质转导(protein transduction)，是近年发展起来的一种将外源蛋白导入细胞的技术。

CD47也称为整联素关联蛋白(integrin-associated protein,IAP)，属于免疫球蛋白超家族，其分子结构由细胞外免疫球蛋白可变样结构域(IgⅤ)、跨膜结构域和可选剪接的细胞质尾组成。CD47是机体内宿主细胞的“自我”标志，广泛表达于细胞表面，在细胞增殖、黏附、迁移、凋亡和吞噬等功能中起重要作用。CD47可以与表达于巨噬细胞的信号调节蛋白α(signal regulator protein alpha,SIRPα)结合避免巨噬细胞的吞噬清除，因此，它可以作为一种抵抗巨噬细胞吞噬的标志物，以确保健康的自体细胞不会被吞噬，造血干细胞、祖细胞和红细胞都高表达CD47以避免被清除。

睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor,CNTF)是一种多能神经营养因子，在调节能量代谢平衡方面具有重要作用。CNTF一方面可以通过其受体作用于下丘脑发挥瘦素样作用抑制生物体过度肥胖，另一方面能够直接作用于脂肪细胞，增强线粒体解偶联蛋白的表达和含量，促进线粒体能量代谢，最终发挥减脂减重作用。

肥胖症是指体内贮积的脂肪量超过理想体重20％以上，是一种由遗传因素、环境因素等多种原因相互作用而引起的慢性代谢性疾病，其发生机制是因为能量摄入超过能量消耗，导致体内脂肪过度蓄积和体重超常。肥胖症已成为全球最大的慢性疾病。因此，减肥不仅是为了审美还为了身体健康，寻找到科学合理且有效的减肥方式极为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对现有技术的不足，提供了一种重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47及其制备方法和用途，所述重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47能够作用于小鼠肥胖模型，达到减脂减重的目的。

本发明提供了一种重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47，所述重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供了所述重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47的制备方法，包括如下步骤：

S1，重组融合蛋白TAT-mCNTF-CD47原核表达载体的构建：