[发明专利]一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

S1、将复苏后的HFF-1细胞经传代后，取处于对数生长期的HFF-1细胞接种于E-plate16培养板，并在实时无标记细胞分析仪上培养20~28h后，添加不同体积百分含量的H2O2作用于HFF-1细胞；

S2、通过实时无标记细胞分析仪监测HFF-1细胞生长曲线，选择对HFF-1细胞的细胞增殖有影响且HFF-1细胞总存活率变化稳定的所述H2O2添加的体积百分含量，构建所述评价模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，H2O2的体积百分含量占培养基总体积的0.001~0.015%；H2O2作用于HFF-1细胞的时间为10~20min。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，HFF-1细胞的复苏包括以下步骤：

将HFF-1细胞悬浮于含有包括8~12Vol.%胎牛血清、0.8~1.3Vol.%青链霉素混合液的DMEM高糖培养基中，培养至细胞量为75~85%时即可。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，取传代后处于数生长期的HFF-1细胞接种于E-plate16培养板时，细胞接种密度为5000-90000个/孔。

5.一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型，其特征在于，采用权利要求1-4任一所述的构建方法构建得到。

6.根据权利要求5所述的评价模型，其特征在于，所述评价模型中，H2O2添加的体积百分含量在0.005~0.015%的范围内；H2O2作用于HFF-1细胞的时间为12~17min。

7.根据权利要求5所述的评价模型，其特征在于，所述评价模型中，H2O2添加的体积百分含量为0.005%，H2O2作用于HFF-1细胞的时间为15min。

8.权利要求6-7任一所述评价模型的应用，其特征在于，所述应用包括探究H2O2在氧化应激体过程中的反应机制、筛选降低细胞氧化应激反应的原料和/或组合物和/或药物、筛选具有氧化应激损伤修复作用的化妆品原料和/或组合物和/或产品中、化妆品安全性和/或功效评价中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述评价模型用于筛选具有氧化应激损伤修复作用的化妆品、化妆品安全性和/或功效评价；所述化妆品为精油，所述精油选自佛手柑精油、葡萄柚精油和莱姆精油中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述精油作用于HFF-1细胞的氧化应激损伤修复时，包括以下步骤：

将构建得到的所述评价模型，转接至新的培养基内，随后再培养20~28h后添加所述精油，所述精油占培养基总体积的0.012~0.026%。