[发明专利]一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A及其应用

说明书

本发明公开了一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A及其应用。本发明利用山羊瘤胃原虫Ophryoscolex caudatus基因组数据，经过组装、注释分析及蛋白表达和功能实验，获得了一个瘤胃原虫特异的溶菌酶，命名为OCLyz1A。该新型来源的溶菌酶酶活力高，并且对以藤黄微球菌为代表的革兰氏阳性菌具有明显抑制作用，可以广泛应用于畜禽饲料、食品及生物工程。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种反刍动物瘤胃原虫“有尾头毛虫”(Ophryoscolex caudatus,O.caudatus)特异溶菌酶(lysozyme,Lyz)在毕赤酵母中的分泌表达方法及应用。

背景技术

溶菌酶，又称为胞壁质酶或N-乙酰胞壁质肽聚糖水解酶；其作为一种天然蛋白质，无毒副作用，广泛存在于高等动植物组织及分泌物、原生动物、昆虫和各种微生物中。溶菌酶根据来源不同可以分为蛋清溶菌酶、动物溶菌酶、植物溶菌酶、微生物溶菌酶和细菌噬菌体溶菌酶；其中，微生物溶菌酶作为一种有效的抗菌剂，通过活性中心水解细菌细胞壁肽聚糖上N-乙酰胞壁酸与N-乙酸葡萄糖胺之间的β-1,4糖苷键，使肽聚糖骨架结构断裂，造成细胞壁损伤，最终因渗透压不平衡而引起菌体细胞溶解，直至死亡。目前已在反刍动物中鉴定到了多种溶菌酶(例如中国CN111187765A公开的反刍动物瘤胃特异溶菌酶LYZ1)，其在消化系统中含量丰富。在消化系统中溶菌酶对于改变动物肠道微生物群、增加肠道有益菌、增强机体抗病力，及提高动物的生产性能也有显著作用；通过添加溶菌酶到饲料中代替或部分代替抗生素，为解决养殖业中面临的抗药性和药物残留等问题提供了一定的途径。

目前尚未见到有关反刍动物瘤胃原虫Ophryoscolex caudatus来源的溶菌酶的报道，已有报道仅表明Ophryoscolex caudatus可以促进瘤胃中纤维的消化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A及其应用。该溶菌酶OCLyz1A可以用作一种新型来源的酶制剂，并广泛应用于畜禽饲料、食品、医学、生物工程、酶工程。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A，该溶菌酶OCLyz1A的氨基酸序列为：

ADEYYTVQSGDYLGKIANRYGVSVSDLCNWNGISNPDLIYPGQRLLVKKSGSSSGSGSGSGSGSGKSGKIYSVTDSQMQKMGWKNYNLPDLNRCLKTFEINTVNRVRHFISQCSHESACGVYTQELGGQSYCSKYDGRRDLGNTQPGDGCRFKGAGYIQLTGRSNYQSFANYIGDSRVMEGVSYVSSKYPWTSAGYWWKSHGLNSLCDNGASVDVITKRVNGGYNGLAERKKYYQRACNIFN。

优选的，所述溶菌酶OCLyz1A的基因编码序列包括以下DNA序列，或者所述溶菌酶OCLyz1A的基因编码序列选自与以下DNA序列具有90％以上同源性的来源于反刍动物瘤胃原虫基因组的序列：