[发明专利]一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立

权利要求书

1.一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：所述检测方法为通过制备菌群失调性腹泻大鼠模型，使用葛根芩连汤治疗后，使用HE染色和RT-PAR检测大鼠结肠PINK1/Parkin受葛根芩连汤表达的影响。

2.如权利要求1所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：葛根芩连汤的制备：按重量比例称取葛根5份，黄芩3份，黄连3份，炙甘草2份，加适量水煎煮，过滤药液使用旋转蒸发器将药液浓缩，浓度为1g/mL，装入灭菌烧杯，放入冰箱保存备用。

3.如权利要求1所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：大鼠模型的制备按照以下步骤进行：

(1)取SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定和硫酸庆大霉素混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00-10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃；

(2)大鼠给药治疗结束后，大鼠禁食不禁水6h，注射麻醉，用组织剪随机剪下大鼠结肠组织，去除组织周边多余脂肪，用预冷过的生理盐水反复冲洗干净，放滤纸上吸干液体，将一部分结肠组织固定在4％多聚甲醛溶液中，得A品；另一部分装入干燥的无菌离心管中，得B品。

4.如权利要求3所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：步骤(1)中SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定178.6mg.kg-1和硫酸庆大霉素31.25mg.kg-1混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00-10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃，按生药量计算为7.02～1.755g·kg^-1。

5.如权利要求4所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：步骤(1)中SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定178.6mg.kg-1和硫酸庆大霉素31.25mg.kg-1混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00-10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃，按生药量计算为3.51g·kg^-1。

6.如权利要求3所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：步骤(2)中大鼠给药治疗7-21d结束后，大鼠禁食不禁水6h，注射麻醉，用组织剪随机剪下大鼠结肠组织，去除组织周边多余脂肪，用预冷过的生理盐水反复冲洗干净，放滤纸上吸干液体，将一部分结肠组织固定在4％多聚甲醛溶液中，得A品；另一部分装入干燥的无菌离心管中，得B品。

7.如权利要求6所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：步骤(2)中大鼠给药治疗14d结束后，大鼠禁食不禁水6h，注射麻醉，用组织剪随机剪下大鼠结肠组织，去除组织周边多余脂肪，用预冷过的生理盐水反复冲洗干净，放滤纸上吸干液体，将一部分结肠组织固定在4％多聚甲醛溶液中，得A品；另一部分装入干燥的无菌离心管中，得B品。

8.如权利要求1所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：所述HE染色检验方法按照以下步骤进行：将A品取出，用PBS缓冲液进行冲洗，乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋后制成石蜡切片后，依次进行脱蜡→水化→苏木素染色→伊红染色→脱水封片→显微镜进行下拍照观察。

9.如权利要求1所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：所述RT-PAR检验方法按照以下步骤进行：取B品100mg，加入1mL Trizol，匀浆机充分研磨提取总RNA，检测RNA浓度及纯度，反转录为cDNA；按PCR试剂盒说明书进行扩增，反应体系：2×RealStar Green Fast Mixture 10μL，10μM基因引物0.5μL，反转录产物1.0μL，ddH2O 8.0μL，反应条件：95℃预变性2min，95℃、15s，60℃、30s，循环45次，以βactin为内参，采用2-ΔΔCt法计算mRNA相对表达量。