[发明专利]一种基于光控的CRISPR-Cas核酸检测试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 202210078298.2 | 申请日： | 2022-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN114410752A | 公开（公告）日： | 2022-04-29 |
| 发明（设计）人： | 周小明;胡梦露 | 申请（专利权）人： | 华南师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12N15/113;C12N9/22 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 郭炜绵 |
| 地址： | 510631 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 光控 crispr cas 核酸 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种基于光控的CRISPR-Cas核酸检测试剂盒，其特征在于包括沉默引导RNA和Cas蛋白；
所述的沉默引导RNA，是由沉默核苷酸和引导RNA通过退火杂交形成；
所述引导RNA是根据靶标核酸序列设计的，包含重复区和间隔区两个区域；
所述沉默核苷酸与引导RNA的间隔区序列完全互补配对，或者与引导RNA的重复区序列完全配对；
所述沉默核苷酸的碱基之间采用PC linker连接；
所述的Cas蛋白为Cas12蛋白或Cas13蛋白。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述沉默核苷酸除了与引导RNA间隔区序列完全互配之外，还往重复区多配对若干个碱基。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述沉默核苷酸中含有1-6个PClinker，每隔5-10个碱基嵌入一个PC linker。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述沉默核苷酸与引导RNA的摩尔浓度比为(1～2):1。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述沉默核苷酸中含有3个PC linker。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述沉默核苷酸中，每隔6个碱基嵌入一个PC linker。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述沉默核苷酸与引导RNA的质量比为2:1。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括荧光报告探针、扩增引物、酶或缓冲液中的一种以上。
9.一种基于上述试剂盒的光控CRISPR-Cas核酸检测方法，其特征在于使用权利要求1-8任一项所述的试剂盒。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将沉默引导RNA、Cas蛋白、荧光报告探针、扩增引物、酶与缓冲液混合配制成预混反应液，加入包含靶标核酸的待测物形成单管内的混合体系；
(2)将上述混合体系进行等温扩增，待等温扩增完成，启动UV光照，连接子断裂，沉默核苷酸从引导RNA上脱离，CRISPR-Cas核酸切割反应启动，最后检测所述混合体系中的荧光信号。
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