[发明专利]一种CA-TM融合蛋白及其在检测梅迪-维斯纳病毒中的应用

说明书

本发明公开一种CA‑TM融合蛋白及其在检测梅迪‑维斯纳病毒中的应用。本发明首先公开了氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CA‑TM融合蛋白。本发明进一步公开了包括以上述CA‑TM融合蛋白作为包被抗原的酶标板的梅迪‑维斯纳病毒抗体间接ELISA检测试剂盒及检测方法。本发明基于CA‑TM融合蛋白建立了梅迪‑维斯纳病毒抗体间接ELISA检测方法用于检测梅迪‑维斯纳病毒抗体水平，具有特异性强、灵敏度高、重复性好和操作方便等特点，临床检测与现有国际商品化试剂盒符合率较高，可实现大规模检测，为梅迪‑维斯纳病血清学检测及流行病学调查提供有效的手段，具有较为广阔的市场前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。更具体地，涉及一种CA-TM融合蛋白及其在检测梅迪-维斯纳病毒中的应用。

背景技术

梅迪-维斯纳病(Maedi-Visna Disease,MVD)是由梅迪-维斯纳病毒(Madedi-Visna Virus,MVV)引起绵羊缓慢性、接触性、进行性的炎性疾病。MVV基因组长度在9200个核苷酸之间，主要由3个逆转录病毒共同的主要基因(gag、pol和env)和调控基因(vif、tat和rev)组成。编码基因分别对应结构蛋白(Gag、Pol和Env)和调节蛋白(Vif、Tat和Rev)。gag编码保护DNA的内部结构蛋白，其中最大的是衣壳蛋白(Capsid protein,CA，也称p25)，它刺激宿主产生抗体，常用于ELISA检测方法。env编码以下两种插入囊膜的蛋白质：表面糖蛋白(Surface protein,SU，也称Gp135)和跨膜糖蛋白(Transmembrane protein,TM，也称Gp46)。其中，SU刺激机体产生抗体，但其具有高度可变性，而TM是一种相对保守得多的蛋白质，它是不同地方国家进行MVD ELISA检测的优先抗原选择。目前为止，没有对MVD有效治疗的方法，对受到MVV感染的病畜只能进行隔离、扑杀。MVV具有较长的潜伏期，往往数年才能在羊群中发现病畜，在这段时间中，已经发病的病畜在羊群中仍在通过排出呼吸道分泌物以及密切接触持续传播病毒。正因为以上这些因素，造成了养羊业不同程度的经济损失，世界动物卫生组织(Office International Des Epizooities，OIE)将MVD列为B类疫病，中国也将其列为Ⅱ类动物疫病。目前只能采用足够的控制程序用来限制病毒的传播或根除疾病。如何能根除MVD在很大程度上取决于如何准确、及时的在羊群中找到发病羊，所以对于MVV的检测手段的使用以及更新就显得尤为重要。

因此，建立一种敏感性高、特异性强的检测绵羊MVV的试剂盒对于MVD的防控、监测及公共卫生都具有重要的意义。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种CA-TM融合蛋白，用于快速检测梅迪-维斯纳病毒抗体水平，以判定绵羊梅迪-维斯纳病毒感染情况。

本发明的第二个目的在于提供上述CA-TM融合蛋白在检测梅迪-维斯纳病毒中的应用和/或在检测梅迪-维斯纳病毒抗体中的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种梅迪-维斯纳病毒抗体间接ELISA检测试剂盒。

本发明的第四个目的在于提供一种梅迪-维斯纳病毒抗体间接ELISA检测方法。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

第一方面，本发明提供了一种CA-TM融合蛋白，所述CA-TM融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明CA-TM融合蛋包含了绵羊梅迪-维斯纳病毒中结构蛋白(Gag)主要刺激机体产生抗体的衣壳蛋白(CA，也称p25)及囊膜蛋白(Env)中较为保守的跨膜蛋白(TM，也称Gp46)。