[发明专利]一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及其应用和试剂盒

说明书

本发明涉及疾病诊断技术领域，具体涉及一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及其应用和试剂盒。一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物，所述的分子标记物为miR‑1587；hsa‑miR‑1587序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的优点：(1)成本低。(2)敏感度高。(3)特异性好。

技术领域

本发明涉及疾病诊断技术领域，具体涉及一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及其应用和试剂盒。

背景技术

结核性脑膜炎患者早期的临床表现和影像学变化均不具有特异性，以及目前实验室诊断试验的低敏感性，导致结核性脑膜炎的临床诊断仍然具有明显的挑战性。脑脊液中结核分枝杆菌的检测是确诊结核性脑膜炎的金标准，但传统的脑脊液涂片 Ziehl-Neelsen染色阳性率低(10～20％)，脑脊液结核分枝杆菌培养时间长(6～8周) 且不够敏感(敏感度为36％～81.8％)。

世界卫生组织建议将GeneXpert MTB/RIF检测作为疑似结核性脑膜炎患者的诊断，然后再进行镜检和培养，但由于在利福平耐药性低的地区成本高且阳性预测价值低，限制了该检测的使用。干扰素-γ释放试验(IGRAs)及以及其他脑脊液实验室参数，包括腺苷脱氨酶(ADA)、淋巴细胞计数、葡萄糖和氯化物浓度，都是非特异性的。因此，仍然迫切需要寻找新的生物标志物用于结核性脑膜炎的诊断。

微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码的小分子单链RNA，长度为20～25 个氨基酸，它与靶基因mRNA特异性结合，参与机体内一系列复杂多变的基因调控过程，在细胞增殖、组织分化、细胞凋亡、疾病发生发展等过程中起着重要作用。miRNA具有高度保守性、时序性和组织特异性，其表达异常与人体多种疾病的发生发展有着密切关系，如肺癌、糖尿病、脑血管病等。越来越多的实验表明，miRNA在结核分枝杆菌感染过程中，通过调节炎症反应、细胞因子信号激活、单核细胞和中性粒细胞增殖、淋巴细胞发育分化等生命活动在免疫应答中起到重要的调控作用，其异常表达与结核病的发生、进展、转归相关。另外，miRNA在外周血、胸腔积液和脑脊液等多种体液中可检测，且稳定性较好，显现其出作为生物标志物的潜在可能性。

近年，对于miRNA作为结核性脑膜炎生物标志物也有相关研究，但研究不多，且多是关注结核性脑膜炎患者外周血中特定miRNA与对照组之间的表达差异。CN110305953A是发明人的在先申请，其公开了一种检测miRNA表达量的系统在制备区分结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎产品中的应用；所述miRNA为 hsa-miR-126-3p、hsa-miR-130a-3p、hsa-miR-151a-3p和hsa-miR-199a-5p，miRNA 表达量为外周血中miRNA的表达量。说明书中还公开了hsa-miR-21-5p结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎之间存在差异表达，但hsa-miR-21-5p在结核性脑膜炎 (TBM)患者和正常人的外周血中不存在差异表达，因此，血浆hsa-miR-21-5p无法作为标志物用于结核性脑膜炎的诊断。

目前临床上主要存在结核性脑膜炎与其他感染性脑膜炎鉴别困难。因此，以往验证的部分miRNA虽然在结核性脑膜炎患者的表达水平明显高于或低于健康对照，但这些miRNA在临床中实际应用会相对受限。另外，相比于血浆和外周血，脑脊液是结核性脑膜炎病灶部位的直接相关体液，其中含有丰富的蛋白和非编码核酸信息，且不同体液中miRNA表达谱会存在一定的差异，因此直接检测结核性脑膜炎患者脑脊液中的miRNA表达水平变化对疾病诊断更具有意义。