[发明专利]三环二萜类化合物的C-14和C-12位羟化酶

权利要求书

1.具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列酶在催化松香烷型三环二萜类化合物C-12和C-14位羟基化，以及催化C环芳香化方面的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其中所述催化松香烷型三环二萜类化合物C-12和C-14位羟基化，所生成的产物为包含C-12位羟基化的单一位点羟化产物和C-14位羟基化的单一位点羟化产物，但不包含C-12位和C-14位同时羟基化的双羟化产物。

3.根据权利要求2所述的应用，其中编码所述酶的多核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.包含权利要求3所述多核苷酸的表达载体，其含有启动子和转录终止子，其中所述启动子与所述多核苷酸可操作地连接，并且所示多核苷酸与所述转录终止子可操作地连接，所述多核苷酸可用于催化三环二萜类化合物C-12和C-14位羟基化、以及催化C环芳香化。

5.包含权利要求3所述多核苷酸、或权利要求4所述表达载体的重组宿主菌，所述宿主菌为酵母菌，如BY系酵母菌、WAT系酵母菌，所述重组酵母菌具有催化三环二萜类化合物C-12和C-14位羟基化、以及催化C环芳香化。

6.权利要求1-3中任意一权利要求所述的应用，其中所述三环二萜类化合物为松香烷型三环二萜类化合物，如次丹参酮二烯或脱氢松香酸。

7.一种催化松香烷型三环二萜类化合物C-14和C-12位羟基化，以及C环芳香化的方法，其包括：

(1)将编码权利要求1所述酶的基因表达盒插入真核表达载体中，制备表达所述酶的重组酵母菌；

(2)以C-14和C-12位未羟化的松香烷型三环二萜类化合物(如脱氢松香酸或次丹参酮二烯)为底物，加入到步骤(1)中所获得重组酵母菌中，制备获得C-14和C-12位羟化的松香烷型三环二萜类化合物；或者

以C环未形成芳香化结构的松香烷型三环二萜类化合物(如次丹参酮二烯)为底物，加入到步骤(1)中获得的表达所述酶的重组酵母菌，制备获得C环芳香化的三环二萜类化合物。

8.如权利要求7所述的方法，步骤(1)所述的真核表达载体为pESC-Leu，所述酶的编码基因插入到NotI、SpeI位点；所述三环二萜类化合物为松香烷型三环二萜类化合物。

9.权利要求1所述酶、或权利要求3所述多核苷酸分子在雷公藤植物栽培育种中的应用，所述的应用作为催化植物中松香烷型三环二萜类化合物C-12和C-14位羟基化，以及C环芳香化，以促进雷公藤有效成分的生物合成。