[发明专利]一种基于MALDI-TOF MS的胰岛素样生长因子I的定量检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种基于MALDI-TOF MS的胰岛素样生长因子I的定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

裂解液；键合胰岛素样生长因子I抗体的磁珠；N15标记的胰岛素样生长因子I内标使用液；校准品；芥子酸基质使用液；

其中，所述校准品是由含不同浓度的胰岛素样生长因子I标准蛋白和1％BSA溶液稀释而成。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括裂解剂和缓冲液；优选地，所述裂解剂选自盐酸胍、尿素、硫脲、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、吐温20、吐温80或3-((3-胆酰胺丙基)二甲基氨基丙基)-1-丙磺酸内盐、辛基-β-葡萄糖苷、辛基硫代葡萄糖苷、聚乙二醇辛基苯基醚、乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种；优选地，所述裂解液含有4～10M的裂解剂和0.1M的Tris-HCl缓冲液。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述键合胰岛素样生长因子I抗体的磁珠是利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作用键合而成。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素为EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin、Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin或BMCC-Biotin中的一种；所述磁珠为链霉亲和素磁珠或羧基磁珠；所述磁珠的直径为0.1～3.5μm。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品的不同浓度为1000ng/mL、750ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、10ng/mL和5ng/mL。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述芥子酸基质使用液中包括溶剂、芥子酸以及三氟乙酸。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述溶剂为乙腈和水的混合液，所述乙腈和水的体积比为1:2，芥子酸的浓度为5～15mg/mL，三氟乙酸的体积含量为0.7％。

8.一种基于MALDI-TOF MS的胰岛素样生长因子I的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将待测样本或校准品置于离心管中，加入0.5～1倍体积量的裂解液进行涡旋混合，之后加入N15标记的胰岛素样生长因子I内标使用液和3～10倍体积量的含0.1％Tween 20的PBS缓冲液涡旋混合；

(2)将键合胰岛素样生长因子I抗体的磁珠加入到所述离心管中，混匀，室温反应1～60min；

(3)瞬时离心10s后，进行磁分离去上清；

(4)依次通过含0.1％Tween-20的PBS缓冲液和去离子水进行清洗；

(5)用芥子酸基质使用液进行洗脱，磁分离后得到含胰岛素样生长因子I的洗脱液；

(6)将所述含胰岛素样生长因子I的洗脱液点在疏水靶板上，干燥结晶，在MALDI-TOFMS上进行检测；

(7)将得到的待测样本中的胰岛素样生长因子I与内标响应值的比值输入标准曲线计算出待测样本中胰岛素样生长因子I的浓度。

9.根据权利要求8所述的定量检测方法，其特征在于，所述标准曲线是以校准品溶液中胰岛素样生长因子I与内标在MALDI-TOF MS上得到的响应值的比值为x，以胰岛素样生长因子I的浓度为y进行标准曲线的拟合。

10.根据权利要求8所述的定量检测方法，其特征在于，所述抗体与磁珠的质量比为1:50～200。