[发明专利]一种基于TP0136NH亚型的神经梅毒诊断试剂盒

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，公开一种基于TP0136NH亚型的神经梅毒诊断试剂盒，包括以下组分：(1)样本稀释液；(2)NanoLuc荧光素酶和梅毒螺旋体Nichols Houton株TP0136蛋白组成的融合蛋白液；(3)proteinA/G包被的酶标板；(4)洗涤液；(5)荧光素酶底物。本发明利用分子生物学基因克隆表达技术，获得梅毒螺旋体Nichols Houton株TP0136重组蛋白，建立检测梅毒螺旋体Nichols Houton株TP0136抗体的神经梅毒诊断方法，并组装成试剂盒，基于神经梅毒感染者脑脊液中Nichols Houton株TP0136抗体水平来区分是否为神经梅毒患者，有利于指导临床合理用药，避免过度腰穿，为神经梅毒的诊治提供一种快速、简便的检测方法。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体地说是一种基于TP0136NH亚型的神经梅毒诊断试 剂盒。

背景技术

神经梅毒是指梅毒螺旋体侵入中枢神经系统造成脑膜、大脑、血管或脊髓等损害。神 经梅毒危害大，可造成脑膜炎、脑卒中、麻痹性痴呆、失明、甚至死亡等严重后果。

由于神经梅毒早期症状轻微，晚期临床表现不特异，因此神经梅毒的诊断更主要依靠 脑脊液的实验室检测。作为神经梅毒脑脊液诊断“金标准”的性病研究实验室试验(venereal disease research laboratory test,VDRL)，特异性90％，敏感性仅为50％，因此VDRL阴性无 法排除神经梅毒。此外，由于存在生物学假阳性问题(即非梅毒患者出现VDRL阳性)， 进一步限制该方法在神经梅毒诊断中的应用。而其他常用的脑脊液检测方法，或不敏感、 或不特异，因此造成神经梅毒诊断困难、误诊率高。一项回顾性研究显示，脑脊液检测神 经梅毒的误诊率高达84.6％(126/149)。

荧光素酶免疫共沉淀系统(luciferase immunoprecipitation system,LIPS)通过在哺乳动 物细胞中将荧光素酶与抗原进行融合表达，以测定血清中未知抗体的检测技术。LIPS将抗 原与荧光素酶融合表达，血清中抗体与抗原特异性结合，抗体再与大颗粒物质protein A/G plus agarose结合，三者形成复合物，通过分析复合物上的荧光素酶与底物作用时荧光强度， 以评估血清中的抗体水平。LIPS系统选择在哺乳动物细胞表达会形成空间构象抗原，可以 提高检测效率。同时该系统采用的抗原不需要经过纯化，简化了实验步骤。因此，LIPS系 统广泛用于多种自身免疫性疾病和病原体检测。然而LIPS采用单管操作，无法实现高通量 检测，实验费时。

因此，亟需开发一种基于TP0136NH亚型的神经梅毒诊断试剂盒。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于TP0136NH亚型的神经梅毒诊断试剂盒。 利用分子生物学基因克隆表达技术，获得梅毒Nichols Houton株TP0136重组蛋白，建立检测 Nichols Houton株TP0136抗体的荧光素酶免疫共沉淀方法，并组装成试剂盒，基于神经梅毒 感染者Nichols Houton株TP0136抗体水平来区分神经梅毒，有利于指导临床合理用药，避免 过度腰穿，为神经梅毒的诊治提供一种快速、简便的检测方法。

本发明为实现上述目的，采取以下技术方案予以实现：

一种基于TP0136NH亚型的神经梅毒诊断试剂盒，包括以下组分：

(1)样本稀释液；

(2)NanoLuc荧光素酶和梅毒螺旋体Nichols Houton株TP0136抗原组成的融合蛋白液；

(3)proteinA/G包被的酶标板；

(4)洗涤液；

(5)荧光素酶底物。

优选地，所述样本稀释液为2％脱脂牛奶。