[发明专利]一种快速检测小鼠血清中鼠肝炎病毒抗体的试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速检测小鼠血清中鼠肝炎病毒抗体的试剂盒，本试剂盒可以同时特异性的检测小鼠血清中的抗鼠肝炎病毒IgG和IgM抗体，包括胶体金试纸卡和样品稀释液，所述胶体金试纸卡包括封闭的盒体以及平铺在所述盒体内部的反应试纸条，所述盒体上分别开设有连通至所述反应试纸条的观察窗和加样孔；所述样品稀释液为包括0.01M PH7.2的PBS和1％tween‑20的混合溶液；本发明提供了一种简便、快速、科学检测小鼠肝炎病毒感染情况的方法，能够快速的筛查小鼠血清中鼠肝炎病毒实验动物是否有相关病毒的感染，为各实验动物单位提供了简便、有效的工具，其意义深远，同时又市场价值巨大。

技术领域

本发明属于免疫胶体金层析分析技术领域，具体涉及一种快速检测小鼠血清中鼠肝炎病毒抗体的试剂盒。

背景技术

小鼠肝炎病毒MHV可引起小鼠的肝炎、脑炎和肠炎。由于MHV可改变各种免疫应答参数，并影响酶的活性，所以会对实验结果产生严重影响。

MHV的主要毒株有MHV1、MHV2[MHV(Pr)]、MHV3、MHV4(JHM)、A59、MHVS、MHVZ和MHVU等，这些毒株在抗原性上相似，但也存在一些差异。传统诊断方法主要是病毒的细胞分离培养、PCR、ELISA和荧光抗体试验。病毒分离培养费时费力且对实验条件和人员要求较高。PCR、ELISA和荧光抗体实验也都需要在实验室通过专业人员操作完成，且用时都在几个小时以上。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测小鼠血清中鼠肝炎病毒抗体的试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种快速检测小鼠血清中鼠肝炎病毒抗体的试剂盒，包括胶体金试纸卡和样品稀释液，所述胶体金试纸卡包括封闭的盒体以及平铺在所述盒体内部的反应试纸条，所述盒体上分别开设有连通至所述反应试纸条的观察窗和加样孔，所述样品稀释液为包括0.01M PH7.2的PBS和1％tween-20的混合溶液；所述反应试纸条包括底板、沿所述底板长度方向依次设置在其上且相接触的样品垫、胶体金复合物垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；所述硝酸纤维素膜包括有检测带一、检测带二和一条对照带，所述检测带一包被有兔抗小鼠IgM二抗，所述检测带二包被有MHV-N20抗原；所述对照带包被有抗Trx单克隆抗体，所述胶体金复合物垫上还固定有胶体金标记的鼠肝炎病毒抗原MHV-N39。

优选的，所述盒体包括有配合设置的上盒体和下盒体，所述观察窗和加样孔设置于盒体的上盒体上，且所述加样孔对应设置在所述样品垫上方，所述观察窗对应设置在所述硝酸纤维素膜上方。

优选的，所述胶体金标记的抗原MHV-N39是将MHV病毒N基因上一段约20KD的蛋白基因插入PET-32a质粒，后用大肠杆菌原核表达的含有Trx标签的约39KD的融合蛋白。

优选的，所述样品稀释液存放在5ml滴瓶内。

优选的，所述检测带二包被的MHV-N20抗原是将MHV病毒N基因上一段约20KD的蛋白基因插入PET-28a质粒，后用大肠杆菌原核表达的蛋白。

优选的，所述检测带一可以特异性的捕获小鼠血清中的抗鼠肝炎病毒IgM抗体，所述检测带二可以特异性的捕获剩余其它亚型的鼠肝炎病毒抗体。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用MHV所有已知毒株都相同的保守抗原片段，作为检测抗原，可检出所有已知MHV毒株所产生的抗体；同时在一个胶体金层析装置上，利用两条检测带，采用捕获法与双抗原夹心法，区分IgM抗体与IgG抗体，可有效区分隐性感染和急性期感染；该快速检测小鼠血清中鼠肝炎病毒染抗体的试剂盒，能在不需要其他仪器设备的情况下，15分钟内检测出小鼠血清中的MHV抗体，并且有效区分IgM抗体和IgG抗体；解决了目前没有一个快速、简单且有效检测小鼠肝炎病毒感染的方法的问题，为各实验动物单位提供了简便、有效的工具，其意义深远，同时又市场价值巨大。

附图说明