[发明专利]马拉色菌的检测组合物、试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 202210046149.8 | 申请日： | 2022-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN114075564B | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 杜蔚安;黄怀球;郑阳阳;吳榕;陆春;黄茜;黄志杰;邓诗莹 | 申请（专利权）人： | 广东华美众源生物科技有限公司;中山大学附属第三医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/6818;C12R1/645 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 朱继超 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市禅城*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 马拉 检测 组合 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种试剂盒，其特征在于，包括CRISPR/Cas检测体系和RPA扩增体系，所述CRISPR/Cas检测体系包括crRNA、Cas蛋白和信号报告探针，所述crRNA包括锚定序列片段和向导序列片段，所述向导序列片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.01、SEQ ID NO.03、SEQ ID NO.06、SEQ ID NO.07、SEQ ID NO.10中的至少一种所示，所述锚定序列片段的核苷酸序列如SEQID NO.11所示；所述锚定序列片段与所述Cas蛋白特异性结合；所述信号报告探针的序列如SEQ ID NO.34所示，5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述RPA扩增体系包括上游引物片段和下游引物片段，所述上游引物片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示，所述下游引物片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、HEX、ROX、JOE、Cy3、Cy5中的一种。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3中的一种。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述CRISPR/Cas检测体系还包括NEBBuffer、乙酸镁激活剂、磷酸肌酸、肌酸激酶、dNTPs、ATP、DTT、醋酸钾、重组酶UvsX、重组酶UvsY、单链结合蛋白或Bsu聚合酶中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述RPA扩增体系还包括RPA酶预混液或激活剂中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述RPA扩增体系的反应温度为37~42℃。
7.权利要求1至6任一项所述试剂盒在非疾病诊断目的鉴别马拉色菌种属中的应用。
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