[发明专利]一种快速检测病毒的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种快速检测病毒的试剂盒及其制备方法。本发明一方面筛选了一种能特异性识别汉坦病毒NP蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。将单克隆抗体联合制备的NP蛋白以及多克隆抗体制备两种胶体金检测试纸条(抗原检测或抗体检测)，所述的试纸条具有良好的特异性和灵敏度，且将两者联合使用，能够进一步提高检测的准确性，适于大规模推广使用。

技术领域

本发明属于病毒疫病诊断技术领域，具体涉及一种快速检测病毒的试剂盒及其制备方法。

背景技术

汉坦病毒，又名肾综合征出血热病毒(HRSV)，最早于1978年从黑线姬鼠中分离成功。分布在我国、朝鲜半岛、俄国和其他东半球地区，可引起人的肾综合征出血热。世界各地的汉坦病毒可分6个血清型，即姬鼠型、家鼠型或大鼠型、棕背型、田鼠型、黄颈姬鼠型和小鼠型或小家鼠型。黑线姬鼠等多种野生啮齿动物是病毒的天然寄主，它们无任何临床症状，但可通过排泄物和分泌物传染给人类。主要临床表现为，在4日左右的发热、头痛等前驱期症状后，出现以非心源性肺水肿和高病死率(52.4％～78.0％)为特征的急性呼吸衰竭，重症3～7日死亡，生存者则很快恢复，无后遗症。其发病机制主要是病毒的直接致病作用，肾脏是早期原发性损伤器官，病毒是肾损伤的直接因素。

汉坦病毒归属布尼亚病毒科，是一种有包膜分节段的负链RNA病毒，基因组包括L、M、S 3个片段，分别编码L聚合酶蛋白、G1和G2糖蛋白、核蛋白(NP)。其中NP是病毒的主要结构蛋白，免疫原性强，刺激机体产生的抗体滴度高、维持时间长，在抗病毒免疫中起重要作用，不同株、型的病毒NP氨基酸序列保守，均携带有T细胞和B细胞抗原决定簇，能诱导机体产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，可直接与体外转录病毒的RNA及被感染细胞的细胞器结合，起着调节病毒复制的作用，常用作为HV感染后的诊断蛋白。

Jiro Arikawa等将杆状病毒表达的病毒核蛋白用于ELISA，可以用于汉坦病毒感染的血清学监测。重组核蛋白和N端缺失的核蛋白用于ELISA和IFA，提供了针对汉坦病毒感染的快速、敏感、安全的诊断方法。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的主要有2点，一是研究一种汉坦病毒核蛋白的单克隆抗体及其制备方法；二是研究一种使用本发明制备的NP蛋白和/或单克隆抗体制备汉坦病毒的检测方法及其试剂盒。为实现本发明的目的，本发明试根据以下技术方案来来实现的：

首先，本发明制备了一种针对汉坦病毒NP的单克隆抗体，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

进一步，本发明对制备的单克隆进行进一步的序列分析，所述的单克隆抗体的重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。所述的单克隆抗体的轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示。

其次，本发明在制备的单克隆抗体的基础上，开发了一种检测汉坦病毒的试剂盒，所述的试剂盒包括有效量权利要求1所述的单克隆抗体。所述的试剂盒为胶体金检测试纸条，所述的试纸条包括多克隆抗体制备的乳胶垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC背板；所述的硝酸纤维素膜包含单克隆抗体制备的检测线、羊抗兔IgG制备的质控线。

再次，本发明还开发了一种汉坦病毒抗体检测试剂盒，所述的试剂盒包括有效量权利要求1所述的单克隆抗体和汉坦病毒NP蛋白。所述的试剂盒为胶体金检测试纸条，所述的试纸条包括汉坦病毒NP蛋白制备的乳胶垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC背板；所述的硝酸纤维素膜包含汉坦病毒NP蛋白制备的检测线、单克隆抗体制备的质控线。