[发明专利]一种样品菌株鉴定方法

说明书

本发明涉及菌株鉴定技术领域，且公开了一种样品菌株鉴定方法，包括以下步骤：S1：基因组DNA提取，首先取1.5mL的离心管，向其中加入200μL预处理液和三颗研磨珠，然后加入菌样品，放入研磨仪中研磨充分备用；S2：混合，把研磨后的原料收集起来，然后放置混合罐中，向混合罐中加入20μL Proteinase K溶液，混合均匀；S3：加入裂解液，向混合罐中加入200μL裂解液，充分混合均匀。本发明能够彻底晾干吸附在材料中残留的漂洗液，防止漂洗液影响鉴定数据，采用组织分离法，对培养的菌株进行挑选纯化，从而方便后面的鉴定工作，提高鉴定的精准度。

技术领域

本发明涉及菌株鉴定技术领域，具体为一种样品菌株鉴定方法。

背景技术

杜仲又名思仲、思仙、仙仲、木棉、丝棉树、玉丝皮等，为杜仲科杜仲属植物，是我国特有的单科单属单种的珍贵药用、经济林树种，是“活化石”植物，主要分布在我国河南、四川、陕西、湖北、云南、甘肃等地，杜仲全身是宝，被誉为“植物黄金”，杜仲皮、杜仲叶均可入药，杜仲胶是杜仲中存在的一类高分子化合物，杜仲的树皮、叶及种皮中均含有丰富的杜仲胶，其叶含杜仲胶2％～4％、树皮含6％～10％、种子含10％～18％。杜仲胶作为一种天然高分子材料，是国际上公认的能够替代传统三叶橡胶的胶源，与天然橡胶同为异戊二烯的高聚物，是反式异戊二烯的高聚体，其独特的橡-塑二重性使其成为新材料开发领域中的研究热点。

传统的化学法提取杜仲胶，由于含胶细胞的细胞壁不易被有机试剂溶解，胶体不易溶出，且溶剂对细胞壁的分解作用是有限的，因此该法在杜仲胶的提取过程中存在杜仲胶产出率低、提取工艺复杂、对环境污染严重且生产成本高等问题，经调查研究发现，杜仲林土壤中的落叶经过一定时间，其纤维及维管结构会被降解而杜仲胶丝保留并暴露出来，说明土壤中可能存在可有效降解杜仲叶提取杜仲胶丝的微生物菌种资源，对采自杜仲林下的腐殖质土进行菌种的分离和纯化，测定各菌种对杜仲叶的降解率，通过降解率对菌种进行初筛。选出优势菌株进行发酵实验并测定发酵过程中的纤维素酶及果胶酶活力，进一步筛选出具有较好产酶能力和较高的纤维类物质去除力的菌株，这些菌株在筛选出来之后还要对其进行鉴定，但是一般的鉴定方法不够精准，不能满足人们的要求，因此提出一种样品菌株鉴定方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种样品菌株鉴定方法，解决了一般的针对菌株的鉴定不够精准，不能满足人们的要求的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种样品菌株鉴定方法，包括以下步骤：

S1：基因组DNA提取，首先取1.5mL的离心管，向其中加入200μL预处理液和三颗研磨珠，然后加入菌样品，放入研磨仪中研磨充分备用；

S2：混合，把研磨后的原料收集起来，然后放置混合罐中，向混合罐中加入20μLProteinase K溶液，混合均匀；

S3：加入裂解液，向混合罐中加入200μL裂解液，充分混合均匀；

S4：加入无水乙醇，向混合罐中加入200μL无水乙醇，充分混合均匀，然后进行离心处理；

S5：清洗，离心后的物料通过吸附柱，用洗涤液和漂洗液进行清洗；

S6：干燥，把吸附柱在室温中放置5-10min；

S7：分析，采用HPLC分析法进行分析，然后使用纸层析法检测样品中是否有目标菌株，如果检测时检测有目标菌株，则进行下一步，否则再次培养；

S8：扩增，把收集到的溶液放入培养基上进行扩增处理；

S9：纯化，采用组织分离法，对培养的菌株进行挑选纯化1-4次，纯化后放置在检测盒中备用；