[发明专利]一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，所述分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为鼠抗人LAG3单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ13‑15，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45003，保藏日期为2021年12月3日。所述杂交瘤细胞株分泌的抗LAG3单克隆抗体与LAG3蛋白具有较高的亲和力，能够特异性地识别真核表达的LAG3蛋白及原核表达的LAG3蛋白。以抗LAG3单克隆抗体构建的LAG3检测试剂盒灵敏度高、特异性好，在多种检测方法中应用效果较好。

技术领域

本发明属于免疫化学技术领域，涉及一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

癌症是目前世界上危害人类健康的最严重的疾病之一，在全球范围内，癌症的发病率处于逐年高发的态势，且呈现出年轻化趋势。早预防，早发现，早治疗，能够显著减少癌症的发病率，延长患者的生存期。因此对癌症相关抗原检测的诊断试剂开发尤为重要。

淋巴细胞活化基因3（Lymphocyte-activation gene 3 protein，LAG3），又称为CD233。LAG3基因定位于12号染色体（12p13）。LAG3是一个Ⅰ型跨膜蛋白，属于免疫球蛋白（Ig）超家族，由胞外区、跨膜区和胞质区3个部分组成，主要表达在活化T细胞、NK细胞、B细胞和浆细胞样DC中。LAG3的胞质尾由三个部分组成：一个丝氨酸磷酸化位点、一个“KIEELE”模体（motif）和一个谷氨酸脯氨酸二肽重复序列（EP repeat）。其中“KIEELE”模体高度保守，并可能参与了LAG3下游抑制信号的转导，缺乏该结构的LAG3蛋白不能发挥对T细胞的抑制作用（Shan C,Li X,Zhang J.Progress of immune checkpoint LAG-3 inimmunotherapy[J].Oncology letters,2020,20(5):207.）。

LAG3是免疫负调节因子，主要结合MHC Ⅱ类分子，调节树突状细胞的功能。LAG3能选择性地与稳定的抗原肽-MHC II分子复合物（pMHC II）结合，因此，LAG3能优先抑制稳定的pMHC II的CD4⁺T细胞的活化。LAG3的表达与特异性T细胞的免疫调节功能呈负相关，抑制LAG3的功能，能够让T细胞重新获得细胞毒性，增强特异性CD8⁺T细胞的抗肿瘤作用，从而增强对肿瘤的杀伤效果。在人CD4⁺细胞中封闭LAG3能促进细胞增殖，并提高IL2、IL4、IFN-γ和TNF-α的表达水平。

LAG3参与调节性T细胞的抑制性作用。当处于肿瘤环境或慢性感染时，长期的抗原刺激会导致LAG3持续高表达，引起T细胞耗竭。此外，PD-1/PD-L1途径和LAG3阻断剂的联合抑制作用产生了抗肿瘤功效，因此，阻断LAG3信号通路能促进耗竭T细胞恢复功能。

LAG3目前是免疫检查点二代靶点中临床数据较多、成药性相对确定的靶点。目前以LAG3为靶点的临床在研药物较多，其中Bristol Myers Squibb（BMS）公司公布LAG3单抗relatlimab联合抗PD-1单抗Opdivo（nivolumab）的组合疗法，在评估未经治疗的转移性或不可切除性黑色素瘤患者的II/III期临床试验RELATIVITY-047（CA224-047）中，相比于Opdivo单独用药可显著改善患者的无进展生存期，试验达到主要终点。这是全球首个抗LAG3抗体的临床III期数据。以LAG3为靶点的药物主要治疗领域包括癌症和自身免疫性疾病。