[发明专利]一种在视网膜Müller细胞中特异性表达的启动子及其应用

说明书

本发明提供了一种在视网膜Müller细胞中特异性表达的启动子Müller‑P，序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的启动子具有很强的在视网膜Müller细胞中特异性表达的活性，基于该启动子的重组腺相关病毒在Müller细胞相关的视网膜疾病的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。此外，本发明的启动子可以在Müller细胞中特异性表达绿色荧光蛋白GFP基因，可以实现Müller细胞的定位，实现对Müller细胞的荧光标记，可用于筛选Müller细胞，在Müller细胞转分化等研究中有潜在应用价值。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种在视网膜Müller细胞中特异性表达的启动子及其应用。

背景技术

视网膜是中枢神经系统的一部分，哺乳动物中枢神经系统包括神经元和神经胶质两种细胞，其中，Müller细胞是视网膜特有的一种神经胶质细胞，由德国解剖学家海因里希·穆勒(Heinrich Müller)于1851年在视网膜中发现，并以发现者的名字命名。视网膜Müller细胞横跨整个视网膜，从内界膜延伸到外核层，形成致密、规则的模式，占视网膜所有细胞数量的90％左右，在维持视网膜的形态和生理功能中起重要的作用。研究发现，Müller细胞本身的形态、生理功能和代谢情况在视网膜病变(例如缺血、缺氧、高压、高糖、毒性损伤、激光损伤)过程中会发生诸多变化，参与了整个视网膜病变过程。

Müller细胞具有独特的解剖学特征，其与玻璃体和视网膜下空间紧密接触，注射到玻璃体或视网膜的药物易于接近或进入Müller细胞，起到治疗效果。不过，采用玻璃体、视网膜注射药物存在药物利用率低的问题，反复注射会导致视网膜褶皱等并发症出现，或因药物毒副作用造成不良反应。基因治疗技术是一种通过将外源正常基因导入缺陷或病变的靶细胞，以纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，以达到治疗目的的方法，通过靶向导入外源基因，可以高效实现优异的治疗效果，降低毒副作用和并发症的出现。随着研究人员对Müller细胞的认识不断加深，利用靶向性的载体系统将外源基因导入Müller细胞，实现Müller细胞相关疾病的基因治疗具有非常好的应用前景。

腺病毒、腺相关病毒等，是目前广泛使用的DNA病毒载体，常用于基因治疗中外源基因的引入。然而，要实现靶向性地将外源基因导入Müller细胞，一方面与病毒类型有关，另一方面，还可通过Müller细胞的特异性启动子来实现。例如Dorrell等人研究证明GFAP启动子驱动的腺相关病毒(AAV)在小鼠玻璃体内注射后，严格转导活化的Müller细胞，而常见的CMV/CAG启动子驱动的AAV则主要定位于神经节细胞。因此，研发能够在Müller细胞特异性表达的启动子，构建相应的重组病毒载体，在Müller细胞相关疾病的基因治疗中具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够在Müller细胞中特异性表达的新启动子。

本发明提供了一种启动子Müller-P，它具有SEQ ID NO.1所示序列。

本发明还提供了一种重组腺相关病毒，它含有上述的启动子Müller-P。

进一步地，它还含有绿色荧光蛋白基因。

本发明还提供了上述的重组腺相关病毒的制备方法，包括如下步骤：

(1)扩增并获得启动子Müller-P的DNA片段；

(2)将启动子Müller-P的DNA片段克隆到腺相关病毒载体中；

进一步地，步骤(2)所述腺相关病毒载体为携带绿色荧光蛋白基因的腺相关病毒载体。

本发明还提供了上述的重组腺相关病毒在导入外源基因至体外培养的细胞中的用途。

进一步地，上述细胞为视网膜Müller细胞。

本发明还提供了上述的重组腺相关病毒在筛选或标记视网膜Müller细胞的试剂中的用途。