[发明专利]粪便保存液及其制备方法和应用

说明书

本申请提供了一种粪便保存液，包括10mM‑300mM的离子强度维持剂、5mM‑100mM的抗凝剂、30％‑90％的固定剂、0.1％‑2％的裂解剂、0.01％‑4％的去除剂、2mM‑200mM的缓冲剂以及水。该粪便保存液能够在低温、常温状态下使用并有效保持粪便样本中肠道微生物的稳定性，有利于粪便样本的保存，扩展了生物样品采集的能力，同时有利于后续肠道微生物基因的提取，有助于肠道微生物的研究。本申请还提供了粪便保存液的制备方法和应用。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，具体涉及粪便保存液及其制备方法和应用。

背景技术

人体肠道存在大量微生物，与人体组成一个高度复杂的共生体系。肠道微生物与代谢综合征、心血管疾病、癌症、类风湿性关节炎以及中枢神经系统疾病的发生有着密切的关联。因此，肠道微生物的研究是国内外科研的热点研究项目。

肠道微生物样本通常是采集粪便，然而粪便离体后，由于环境的巨大变化其中严格的厌氧微生物不再增殖，甚至死亡，兼性厌氧微生物仍能增殖生长，因此，采集后的粪便样本应当在短时间内合理的保存，保证肠道菌群结构基本不变。目前，粪便样本采集后立即进行超低温冷冻是目前公认的可以保持微生物菌群结构不发生变化的保存方式。然而超低温冷冻保存需要大型冷冻设备，同时采样范围受限。因此，开发了一种可以在日常条件下使用并且有效保持粪便样本中肠道微生物稳定性的保存液是非常有必要的。

发明内容

有鉴于此，本申请提供了一种粪便保存液及其制备方法和应用，该粪便保存液能够在低温、常温状态下使用并有效保持粪便样本中肠道微生物的稳定性，有利于粪便样本的保存，扩展了生物样品采集的能力，同时有利于后续肠道微生物基因的提取，有助于肠道微生物的研究。

第一方面，本申请提供了一种粪便保存液，包括10mM-300mM的离子强度维持剂、5mM-100mM的抗凝剂、30％-90％的固定剂、0.1％-2％的裂解剂、0.01％-4％的去除剂、2mM-200mM的缓冲剂以及水。

可选的，所述裂解剂的含量为0.2％-1.5％。

可选的，所述去除剂的含量为0.1％-2％。

可选的，所述固定剂的含量为40％-80％

可选的，所述粪便保存液包括20mM-200mM的所述离子强度维持剂、10mM-50mM的所述抗凝剂、40％-80％的所述固定剂、0.2％-1.5％的所述裂解剂、0.1％-2％的所述去除剂和10mM-100mM的所述缓冲剂。

可选的，所述离子强度维持剂包括氯化钠、氯化钾和柠檬酸钠中的至少一种。

可选的，所述抗凝剂包括乙二胺四乙酸和柠檬酸钠中的至少一种。

可选的，所述固定剂包括甲醇、乙醇和异丙醇中的至少一种。

可选的，所述裂解剂包括异硫氰酸胍、十六烷基三甲基溴化铵、β-巯基乙醇和苯酚中的至少一种。

可选的，所述去除剂包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯聚吡咯烷酮、β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、半胱氨酸和三羟甲基氨基甲烷硼酸盐中的至少一种。

可选的，所述缓冲剂包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、磷酸盐、N,N-二羟乙基甘氨酸和3-环已氨基丙磺酸中的至少一种。

可选的，所述粪便保存液包括10mM-300mM的氯化钠、5mM-100mM的乙二胺四乙酸、30％-90％的乙醇、0.1％-2％的异硫氰酸胍、0.01％-4％的聚乙烯吡咯烷酮和2mM-200mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。进一步的，所述粪便保存液包括150mM的氯化钠、25mM的乙二胺四乙酸、70％的乙醇、0.5％的异硫氰酸胍、0.75％的聚乙烯吡咯烷酮和100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。

可选的，所述粪便保存液的pH值为7-9.2。进一步的，所述粪便保存液的pH值为8-8.5。