[发明专利]具有抑制胰脂肪酶活性的N6

权利要求书

1.一种具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶-乙酸乙酯基-3’-乙酯基-β-核糖腺苷，其特征在于：是从蝉花(Cordyceps chanhua)培养物中分离制备得到的，分子式为C₁₆H₂₁N₅O₇；其结构式如下：

所述N⁶-乙酸乙酯基-3’-乙酯基-β-核糖腺苷为黄色油状，对胰脂肪酶的半数抑制浓度(IC₅₀)为0.267mg/mL。

2.根据权利要求1所述一种具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶-乙酸乙酯基-3’-乙酯基-β-核糖腺苷的制备方法，其特征在于，具体操作步骤如下：

(1)蝉花(Cordyceps chanhua)菌种选择

所用蝉花菌株的国际菌库号为WDCM1031；

(2)菌株培养

培养方法为液固混合培养，具体工序如下：

(2.1)种子培养

将蝉花菌株水液原种接种于萨氏固体平板培养基，每个培养皿的接种量为100～300μL蝉花菌株水液原种，于22～29℃恒温、培养8～16d，得到一级菌种；

萨氏固体平板培养基的配方为葡萄糖40g，蛋白胨10g，酵母浸出粉10g，琼脂20g，加蒸馏水定容至1000mL；

(2.2)二级液体种子培养

将一级菌种的菌块按0.5～2cm²/100mL打散，接种至液体摇瓶培养基中培养；

液体摇瓶培养基为：葡萄糖30～50g/L，蛋白胨8～12g/L，酵母浸出粉8～12g/L，蒸馏水定容；

在大于等于100mL的三角瓶中，加入30～50％三角瓶体积的液体摇瓶培养基，每个三角瓶按0.5～2cm²/100mL的量接种一级菌种的菌块，置于恒温振荡培养箱，温度22～29℃、转速180～240rpm，培养3～5d，即得到二级液体种子；

(2.3)固体培养

将二级液体种子接种到萨氏固体培养基上，接种量为每个培养皿150～300μL，涂布均匀，温度22～29℃，恒温培养4～8天，收集菌丝，得到固体培养物；

(3)固体培养物中有效成分的提取和精制

(3.1)固体培养物中有效成分的提取

用乙酸乙酯提取剂对固体培养物进行超声提取、滤膜过滤或离心分离、真空减压去除溶剂，得到有效成分提取物；

(3.2)提取物初步纯化

采用半制备型反相高效液相色谱对有效成分提取物进行初步纯化，得到黄棕色的初步纯化物；

(3.3)初步纯化物的精制

采用半制备型反相高效液相色谱对黄棕色的初步纯化物进行精制，在乙腈溶液洗脱条件下，收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N⁶-乙酸乙酯基-3’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到黄色油状的N⁶-乙酸乙酯基-3’-乙酰基-β-核糖腺苷。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3.1)中，将固体培养物在温度-50～130℃条件下干燥，按重量体积比1g：0.5～5mL在固体培养物中加入乙酸乙酯提取剂；40KHz超声提取20～200分钟；经0.20～2.5μm滤膜过滤或4000～15000转/分钟条件下离心，得滤液或离心上清；滤液或离心上清在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去提取剂，得到有效成分提取物。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3.2)中，利用半制备液相色谱，流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0～20min用5％升～60％升流动相B洗脱；进样体积20～100μL；柱温20～40℃；流速2～5mL/min；检测波长为260nm；色谱柱：反相C-18柱；按峰收集，分为8个组分，其中第6个组分中具有需要的化合物；在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去提取剂，在小于等于130℃条件下干燥，得到黄棕色的初步纯化物。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3.3)中，色谱分离制备条件为：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0～20min用15％升至30％流动相B洗脱；进样体积20～100μL；柱温20～40℃、流速2～5mL/min；检测波长为260nm，色谱柱：反相C-18柱；收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N⁶-乙酸乙酯基-3’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到黄色油状的N⁶-乙酸乙酯基-3’-乙酰基-β-核糖腺苷。