[发明专利]一种针对塞尼卡谷病毒的核酸快速检测方法

说明书

本发明公开了一种针对塞尼卡谷病毒的核酸快速检测方法，涉及核酸检测领域，包括如下检测方法：步骤一：检测试剂和材料准备，检测试剂包括以下成分：检测猪是否感染塞尼卡谷的引物组、反应液、阴性对照组材料、感染塞尼卡谷病毒的血清样本、口蹄疫病毒核酸样本；引物组包括引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6，且引物组中各引物干粉1OD；反应液包括反应浓缩液和逆转录酶，反应浓缩液包括DNA聚合酶、Buffer、dNTP、MgSO4、Betaine和荧光染料；阴性对照组材料包括不含目的基因反应液；本发明的试剂盒可用于多个检测平台上，不仅可以用在基因快速检测仪和定量PCR仪，也可以用在其他可以提供恒定温度的设备上，如金属浴等。

技术领域

本发明涉及核酸检测领域，具体是一种针对塞尼卡谷病毒的核酸快速检测方法。

背景技术

塞尼卡谷病毒，是猪原发性疱疹病的主要病原。猪感染后通常表现为急性、自限性水疱症状。临床表现为采食量下降，之后鼻吻出现水疱性病变，可见1个或多个大小不一、充满液体的囊泡；囊泡破裂后发展成溃疡病变，在感染后10-15d形成厚痂。水疱性及溃疡性病变多出现于蹄冠部趾间裂和冠状带周围，导致边缘上皮疏松坏死，严重者跛行，站立困难。有些母猪腹部和乳房部出现红色斑点，或伴有发热和厌食症状，甚至发烧39.5-40.5℃，部分跛行的母猪体温可达41.0℃。新生仔猪体态虚弱，嗜睡，不愿吸乳，并出现急性死亡，在蹄掌部可见部分化脓性小泡。塞尼卡谷病毒为小RNA病毒科塞尼卡病毒属的唯一成员。SVV结构呈二十面体，直径25-30nm，无囊膜衣壳。基因组为线性、不分节段、单股正链RNA，全长约7.2-7.3kb，5′和3′有非编码区，具有多聚腺苷酸尾。病毒基因含1个开放阅读框(ORF)，编码含 2181个氨基酸的多聚蛋白前体，之后被裂解为1个前导蛋白和3个主要多聚蛋白(P1、P2和P3)；P1基因区域主要编码4个结构蛋白(VP4、VP2、VP3 和VP1)，形成病毒的核衣壳，而P2和P3基因区域编码7个非结构蛋白(2A、 2B、2C、3A、3B、3C和3D)；通过对小RNA病毒科的12个代表性病毒属病毒进行全基因组序列比对发现，塞尼卡病毒属与心肌炎病毒属遗传关系最近。目前，北美、南美地区以及澳大利亚都有猪群发生SIVD的报道。我国于2016 年也首次分离到了SVV，鉴于其对仔猪较高的致病性，应加以关注。

目前检测塞尼卡谷的方法有RT-PCR、荧光定量PCR、ELISA、病毒分离、病毒中和等SVV实验室诊断方法，但上述方法操作繁琐，需依赖昂贵的仪器，且耗时较长，在2h以上。因此建立快速、准确、灵敏、特异的现场检测方法对塞尼卡谷病的预防与控制具有重大意义。

因此，本领域技术人员提供了一种针对塞尼卡谷病毒的核酸快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种针对塞尼卡谷病毒的核酸快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的目前检测塞尼卡谷的方法有RT-PCR、荧光定量PCR、ELISA、病毒分离、病毒中和等SVV实验室诊断方法，但上述方法操作繁琐，需依赖昂贵的仪器，且耗时较长，在2h以上。因此建立快速、准确、灵敏、特异的现场检测方法对塞尼卡谷病的预防与控制具有重大意义的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种针对塞尼卡谷病毒的核酸快速检测方法，包括：

步骤一：检测试剂和材料准备，检测试剂包括以下成分：检测猪是否感染塞尼卡谷的引物组、反应液、阴性对照组材料、感染塞尼卡谷病毒的血清样本、口蹄疫病毒核酸样本；引物组包括引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6，且引物组中各引物干粉1OD；反应液包括反应浓缩液和逆转录酶，反应浓缩液包括DNA聚合酶、Buffer、dNTP、MgSO4、Betaine和荧光染料；阴性对照组材料包括不含目的基因反应液；

步骤二：病毒RNA提取，使用病毒RNA提取试剂盒提取样本RNA；