[发明专利]一种通用型的口蹄疫病毒结构蛋白抗体、制备方法及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种通用型的口蹄疫病毒结构蛋白抗体、制备方法及应用。本发明以O型口蹄疫病毒146s为免疫原，免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，筛选获得两株高效分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞系，并获得了两种鼠单克隆抗体m33和m77。免疫印迹和间接免疫荧光试验表明所述单克隆抗体m33和m77对O型不同谱系病毒和A型谱系不同病毒均具有广谱反应性。m33和m77抗体特异性结合在FMDV结构蛋白中的型间保守抗原表位，相较于现有抗体，显著提高了检测结果的灵敏度和特异性，适用于O型和A型FMDV感染或灭活疫苗免疫后结构蛋白抗体的检测，是一种FMD非免疫动物群体感染状况监测的新方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种通用型口蹄疫病毒结构蛋白抗体、制备方法及应用。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的传染病。FMDV属于微核糖核酸病毒科(picornaviridae)口蹄疫病毒属(aphthavirus)的成员。FMDV目前有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和A sia1(亚洲1型)7个血清型。各型之间几乎没有免疫保护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病。该病对养殖业和国际畜产品贸易具有严重影响，因而各国高度重视对此病的预防与控制。预防与控制口蹄疫的关键是高效疫苗和准确诊断方法的应用。

由于同一血清型内不同亚型的抗原性均有不同程度的差别，血清学交叉反应的程度也各有不同，使得口蹄疫的诊断和控制存在很大的难度。单克隆抗体具有识别单一抗原位点的能力，与抗原结合特异性强，均质性高，生物活性单一，易于标准化，可批量生产的特点，广泛应用于生物医学领域中。目前，中国主要流行O型和A型FMD。因此，研发O型和A型通用型FMD通用型单克隆抗体对于O型和A型FMD的诊断和预防具有重要意义。但是，由于FMDV抗原结构复杂，不同血清型、基因型和分离株的抗原位点和抗原表位都不尽相同，存在广泛的抗原变异，同时也存在着决定病毒种属特性的保守抗原结构，开发广谱型的口蹄疫病毒抗体检测试剂盒，需要筛选到识别型间保守表位的广谱特异性单克隆抗体，但目前广谱特异性单克隆抗体稀少，这给建立广谱的FMDV抗体检测方法带来一定障碍。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种对O型和A型口蹄疫病毒不同谱系毒株结构蛋白具有广谱中和作用的单克隆抗体、制备方法及应用，具体包括以下内容：

第一方面，本发明提供了一种通用型的口蹄疫病毒结构蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体为m33或m77，所述单克隆抗体m33的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述单克隆抗体m77的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

第二方面，本发明提供了一种编码上述第一方面所述单克隆抗体m33的基因片段，编码所述单克隆抗体m33重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述单克隆抗体m33轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

第三方面，本发明提供了一种编码上述第一方面所述单克隆抗体m77的基因片段，编码所述单克隆抗体m77重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.7所示，编码所述单克隆抗体m77轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.8所示。

第四方面，本发明提供了一种表达载体，所述表达载体含有上述第二方面所述的基因片段，或所述表达载体含有上述第三方面所述的基因片段。

第五方面，本发明提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有上述第四方面所述的表达载体，或其基因组中整合有上述第二方面或第三方面所述的基因片段。

第六方面，本发明提供了一种免疫偶联物，所述免疫偶联物包括：